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    中鹽核酸酶基本參數(shù)
    • 品牌
    • ArcticZymes Technologies
    • 型號
    • 70950-202/70950-150/70950-160
    • 貨號
    • 70950-202/70950-150/70950-160
    • 中文描述
    • M-SAN HQ中鹽核酸酶
    • 規(guī)格
    • 25kU/500kU/5MU
    • 級別
    • HQ及GMP
    • 應(yīng)用領(lǐng)域
    • 大規(guī)模生物藥生產(chǎn)中,去除核酸殘留
    中鹽核酸酶企業(yè)商機

    跟其他類型的核酸酶一樣,SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶的滅活方法有很多,分為可逆滅活及不可逆滅活。金屬離子螯合劑如EDTA會可逆抑制兩者的活性,加入的EDTA濃度一般是溶液中Mg2+濃度的2倍左右即可完全抑制活性;后續(xù)補加過量的Mg2+即可恢復核酸酶活性。加熱、還原劑(如DTT)、咪唑、甘油及表面活性劑(如高于15%濃度的Triton X-100、SDS、尿素等)等都可以使其不可逆失活。在生物工藝流程,需要結(jié)合上下游應(yīng)用需要選擇合適的方法去除或滅活核酸酶。M-SAN HQ中鹽核酸酶不含動物源成份,無蛋白酶活性;浙江生理鹽條件中鹽核酸酶70950-150

    浙江生理鹽條件中鹽核酸酶70950-150,中鹽核酸酶

    除了獲得載體的滴度及產(chǎn)量,生產(chǎn)慢病毒更關(guān)心的指標主要是各種污染物的去除。總DNA污染的去除百分比在99.1-99.84%,總蛋白污染物的去除百分比在99.85-99.9%。針對宿主細胞的DNA(HCD)及蛋白(HCP),有報道其去除百分比分別為99.8%和99.4%。因為不僅殘存的DNA可能是個問題,而且DNA的大小以及由此引起的可能轉(zhuǎn)移整個有功能的開放閱讀框也是問題,因此監(jiān)管機構(gòu)對殘存DNA污染的分子量上限的要求越來越高。例如,F(xiàn)DA的指南‘生產(chǎn)用于傳染病適應(yīng)癥的病毒疫苗的細胞基質(zhì)和其他生物材料的特性和鑒定’中說明,殘留的細胞宿主的DNA片段不能超過一個功能基因的長度,估計在200bp左右。天津M-SAN HQ中鹽核酸酶70950ArcticZymes致力于提供高質(zhì)量產(chǎn)品,中鹽核酸酶具有好的批間一致性、穩(wěn)定可靠的質(zhì)量。

    浙江生理鹽條件中鹽核酸酶70950-150,中鹽核酸酶

    大多數(shù)研究級別的慢病毒是通過批次濃縮而不是粗制劑之后應(yīng)用的,濃縮基本上是通過兩步離心法產(chǎn)生的。在70000g通過超速離心濃縮后的慢病毒再通過蔗糖緩沖(50000g)純化,然后溶解在配方緩沖液中。一種改進,特別是純度方面的改進,基于離心/色譜聯(lián)用的純化方法。例如,Kutner等評估了組合純化/濃縮方法。蔗糖緩沖的超速離心結(jié)合陰離子交換層析獲得了88.2%的收率,而相反的組合則獲得了77.6%的收率。在兩種方法中,濃縮都超過了100倍,病毒滴度都超過了1010TU/ml(VSV-g包被的慢病毒)。

    ?通過三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系生產(chǎn)病毒載體,會引入宿主細胞DNA殘留(HCD)、蛋白殘留(HCP)、工藝雜質(zhì)(如antibiotics、核酸酶等外源物質(zhì))等污染,存在潛在的致瘤性和免疫原性等風險。藥品監(jiān)管機構(gòu)一般允許生物制品中存在10ng/dose以下的殘留DNA。此外,根據(jù)雜質(zhì)來源、工藝以及產(chǎn)品類型不同,也會對HCD限度做不同要求。為了達到這個要求,一般通過核酸酶處理和色譜聯(lián)用的方法。一般在細胞培養(yǎng)液裂解/收獲、澄清收獲及超濾濃縮等環(huán)節(jié)加入核酸酶處理,需要工藝摸索來確認處理方式。ArcticZymes Technologies的研發(fā)基于北極海洋區(qū)的自然資源;

    浙江生理鹽條件中鹽核酸酶70950-150,中鹽核酸酶

    大規(guī)模生產(chǎn)階段,AAV/LV載體生產(chǎn)流程跟抗體、疫苗類藥物的生產(chǎn)類似,主要包含上游培養(yǎng)、下游純化及制劑部分。上游培養(yǎng)分為質(zhì)粒開發(fā)、細胞擴增、三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染及病毒載體生產(chǎn)等步驟。下游純化分為細胞裂解釋放AAV病毒顆粒(可以通過去污劑、機械作用、高滲或凍融操作等)or收獲細胞上清液得到含LV病毒原液、加入核酸酶以減少宿主細胞核酸污染、澄清是通過離心或過濾等方法去除細胞碎片和雜質(zhì)等、超濾濃縮以減少后續(xù)色譜純化體系、親合及離子交換等純化得到高純度病毒載體。制劑部分主要是超濾更換緩沖液、過濾除菌及制劑灌裝等。中鹽核酸酶更適合細胞培養(yǎng)體系,相比全能核酸酶,酶用量減少到1/3-1/2,HCD去除效率更高。湖南等滲條件中鹽核酸酶

    M-SAN HQ中鹽核酸酶兼容常見細胞培養(yǎng)基,在多種培養(yǎng)基條件下去除核酸污染效率更高;浙江生理鹽條件中鹽核酸酶70950-150

    細胞基因藥物的基因遞送有病毒及非病毒兩種方式,其中病毒遞送更為常用。在病毒遞送路徑中,腺相關(guān)病毒(AAV)和慢病毒(Lentivirus)是常用的兩種載體;差別是病毒基因組的存在形式,AAV的基因組一般不整合到染色體中,以游離形式存在于染色體之外,且一般會表達數(shù)年之久;而慢病毒的基因組則會整合到染色體達到長期持續(xù)表達的目的。此外,其它用于基因藥物的病毒載體有單純皰疹病毒(HSV)、痘苗病毒(Vaccina Virus)、痘病毒(Poxviruses)。浙江生理鹽條件中鹽核酸酶70950-150

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