棉殼二孢

無機磷細菌培養(yǎng)基（不含瓊脂）是專為“溶磷菌”篩選與活性測定設計的合成液體培養(yǎng)基。其配方精髓在于“難溶磷”：磷酸三鈣〔Ca?(PO?)?〕以懸浮顆粒形式存在，不提供任何磷；葡萄糖或甘露醇擔任碳源，硫酸銨為氮源，并輔以Mg2?、K?、微量元素及磷酸鹽緩沖液，pH穩(wěn)定在6.8–7.2。唯有能分泌有機酸、質(zhì)子或磷酸酶的細菌，方可將不溶性磷轉(zhuǎn)化為可溶PO?3?，供自身同化并釋放到液相中，使原本乳白的懸濁液逐漸澄清，上清有效磷濃度上升，實現(xiàn)“溶磷”可視化與可量化。實驗流程簡潔高效：250 mL三角瓶裝50 mL培養(yǎng)液，接入土壤或根際稀釋液，28℃、170 r/min振蕩培養(yǎng)5–7天；每24 h取樣離心，鉬銻抗比色法測定鉬藍吸光度，繪制“溶磷-時間”曲線。高效菌株72 h內(nèi)上清磷濃度可突破200 mg·L?1，pH降至4.5以下，溶磷率與酸度呈明顯負相關(guān)。若需高通量比較，可改用96深孔板，同步測定OD???與可溶性磷，計算單位生物量溶磷效率，快速鎖定優(yōu)良菌株。質(zhì)量控制要點：滅菌后磷酸三鈣易沉降，使用前需渦旋或磁力攪拌重懸；背景可溶磷須低于0.5 mg·L?1，避免假陽性。儲存過程若出現(xiàn)絮凝，多為鈣-蛋白復合物，可超聲打散，不影響活性。晝夜輸送給花生，畝產(chǎn)蛋白因此提升三成，農(nóng)戶少施20公斤尿素，卻多收一筐飽滿果仁。棉殼二孢

長賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus macroides）是2013年從鯉腸道中分離的新成員，因細胞呈長桿、鏈狀排列而得名。它能在1/2LB培養(yǎng)基上形成淺褐色、光滑、直徑約1mm的菌落，革蘭氏陽性，具周生鞭毛，可產(chǎn)卵圓形芽孢，耐pH6–9、鹽0–6%，更適溫度35–37℃，對干旱、高溫和膽汁鹽均有良好適應力。其“本領”在于三酶合一：吲哚乙酸（IAA）分泌量達18mg/L，可刺激小麥根長增加35%；ACC脫氨酶活性降低植物乙烯水平，緩解鹽脅迫；鐵載體與蛋白酶協(xié)同，可抑制番茄青枯、辣椒疫霉等病原菌，抑菌帶寬22–28mm。山東大棚試驗顯示，用長賴氨酸芽孢桿菌菌液灌根，番茄根結(jié)線蟲侵染率下降42%，果實Vc含量提高12%，產(chǎn)量增8.3%。工業(yè)端，菌株ZJB-17009的酯酶對N-苯乙酰-DL-氨基酸水解選擇性達99%，已被用于綠色合成L-氨基酸；另一株C1在白酒窖池可產(chǎn)己酸和乙酸乙酯，使基酒主體香提高30%，為“增香菌”提供新選擇。未來，借助合成生物學，長賴氨酸芽孢桿菌有望被植入耐鹽、產(chǎn)聚-γ-谷氨酸模塊，成為鹽堿地“一菌多效”的先鋒，讓貧瘠土地也飄出豐收香。地衣生考克娃酵母③分泌蛋白酶與脂肽，抑制番茄青枯、辣椒疫霉，病指下降四成。

煙酸芽孢桿菌（Bacillus niacini）是芽孢桿菌屬里的“維生素工匠”。20 世紀 90 年代由日本科學家在腐殖土中分離，因其能利用煙酸（維生素 B?）為碳氮源生長而得名。菌體桿狀、周生鞭毛，可形成橢圓芽孢，耐堿、耐干燥，更適 pH 8–9、溫度 30–37 ℃，在貧瘠土壤里依然繁殖迅速。首要本領是“分解頑固”。基因組編碼煙酸脫氫酶、6-羥基煙酸加氧酶等關(guān)鍵基因，可把腐殖質(zhì)中的吡啶環(huán)打開，生成甲酸、酸和 NH?，既為自身供能，也為周圍微生物提供“開胃小菜”。在堆肥試驗中，接種 10? CFU/g 使稻草腐殖化度提高 25 %，堆體溫度 48 h 升至 65 ℃，纖維素降解率增加 30 %，堆肥周期縮短 7 天。第二技能是“促生抗逆”。菌株 IAEA 能分泌 IAA 12 mg/L，并溶出有機磷 2.8 mg/L，玉米根系增 28 %，葉綠素提高 1.8 SPAD；同時產(chǎn)生環(huán)脂肽，對番茄青枯、黃瓜枯萎抑菌帶寬達 24 mm，溫室防病效果 58 %，與多菌靈相當。工業(yè)端，煙酸芽孢桿菌是“綠色催化劑”。其煙酸酶可將煙酸一步轉(zhuǎn)化為 6-羥基煙酸，用于合成降壓藥尼群地平，底物轉(zhuǎn)化率 98 %，比化學路線減少三廢 70 %；耐熱淀粉酶在 60 ℃仍保持 85 % 活性，已用于洗滌劑，節(jié)能 20 %。

譎詐明串珠菌（Leuconostoc fallax）是明串珠菌屬中“貌善心狠”的。菌落乳白、表面光滑，細胞球形成對，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，看似溫順，卻能在泡菜前期迅速增殖，借“糖衣”胞外多糖包裹自己，欺騙宿主免疫系統(tǒng)，故得“譎詐”之名。基因組分析揭示，它攜帶一套罕見的寡肽轉(zhuǎn)運與組氨酸激酶雙組分系統(tǒng)，可感知滲透壓與酸度變化，一旦環(huán)境pH降至4.0以下，便啟動“式”產(chǎn)酸爆發(fā)，短時間內(nèi)釋放大量乳酸與乙酸，排擠同壇的乳酸菌盟友，獨占發(fā)酵主導權(quán)。更“狡黠”的是，該菌能分泌一種細菌素Fallaxin，對李斯特菌、金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性食源性致病菌具有窄譜殺傷，卻對自身及泡菜關(guān)鍵菌株無害，借此在微生態(tài)博弈中“借刀殺人”。然而，其高活性胞外多糖合成酶在低溫（4℃）仍持續(xù)表達，導致泡菜后熟期口感發(fā)黏，被食品工程師視為“品質(zhì)陷阱”。研究嘗試通過CRISPR敲除其負調(diào)控基因rex，使譎詐明串珠菌在pH 3.8即自動休眠，既保留抑菌特長，又避免過度產(chǎn)黏，為精細控制傳統(tǒng)發(fā)酵蔬菜的微生態(tài)提供了一把“基因開關(guān)”。它以甲醇、甲胺等一碳化合物為主食，卻能把這些常被忽視的小分子變成高值產(chǎn)物。

擴散芽孢桿菌（Bacillus diffusus）是芽孢桿菌屬里的“運動健將”。菌體桿狀、周生鞭毛，在瓊脂表面可形成迅速擴展的薄膜狀菌落，24 h內(nèi)直徑達80 mm，故得名“diffusus”。其更適生長溫度30–37 ℃，pH 6–9，耐干燥、耐紫外，芽孢可存活十年以上，為制劑化提供質(zhì)量特性。一、快速定殖菌株DSM 13271分泌大量胞外多糖，降低表面張力，使菌體在沙壤土中遷移速度提高3倍；與枯草芽孢桿菌復配，可形成“生物被膜”，優(yōu)先占據(jù)根際生態(tài)位，抑制病原菌入侵。二、廣譜抑菌擴散芽孢桿菌產(chǎn)生diffusin脂肽，對番茄青枯、辣椒疫霉、棉花黃萎等病原菌抑菌帶寬達28 mm；溫室試驗顯示，畝用200 g菌粉滴灌，黃瓜枯萎病指下降45 %，農(nóng)藥用量減少三分之一。三、促生提質(zhì)菌株IAA產(chǎn)量25 mg·L?1，溶磷2.9 mg·L?1，并產(chǎn)揮發(fā)性2,3-丁二醇，誘導玉米側(cè)根增30 %，吸磷量提20 %；新疆鹽堿地示范，冬小麥千粒重增1.5 g，產(chǎn)量提高8 %。四、工業(yè)酶潛力其耐堿蛋白酶在pH 10、50 ℃下活性比較高，已用于洗滌劑，低溫去污力提升25 %；胞外多糖乳化力強，可作為鉆井泥漿降濾失劑，耐鹽達12 %。收獲后根瘤脫落，礦化釋氮，后茬玉米吸氮量提15%，土壤硝態(tài)淋失降四成，地下水不再喊“又咸又綠”。產(chǎn)灰色鏈霉菌

同時釋放揮發(fā)性 2,3-丁二醇，啟動植物 ISR 信號，使葉片過氧化物酶活性提高 1.8 倍，達到“未病先防”。棉殼二孢

Bushnell-Haas瓊脂（Bushnell-Haas Agar，簡稱BH瓊脂）是一種專為檢測環(huán)境微生物降解烴類能力而設計的合成培養(yǎng)基。其配方精簡而精細：以磷酸鉀緩沖對維持pH 7.0±0.2，硫酸銨提供氮源，氯化鈉、硫酸鎂與微量金屬鹽構(gòu)成基本離子環(huán)境，卻不含任何有機碳源。正這份“刻意為之的貧瘠”，使BH瓊脂成為篩選“吃油微生物”的黃金標準——只有當培養(yǎng)皿中額外滴加柴油、石蠟或多環(huán)芳烴時，能利用這些烴類作為碳與能源的細菌、酵母乃至菌才會長出可見菌落，降解能力越強，菌落周圍出現(xiàn)透明暈圈的速度越快、直徑越大。自1940年代問世以來，BH瓊脂被廣用于石油污染土壤、海洋表面膜及工業(yè)廢水的微生物資源普查。研究人員只需將樣品勻漿涂布于表面覆有薄層原油的BH平板，28℃培養(yǎng)3–7天，即可依據(jù)菌落形態(tài)與暈圈初步分離高效降解株；再結(jié)合GC-MS測定殘余烴量，可在兩周內(nèi)完成從篩選到定量評價的完整流程。近年來，隨著極端環(huán)境研究升溫，BH配方被靈活調(diào)整：添加3% NaCl可分離耐海鹽烴降解菌；降低pH至4.5、補充Cu2?則用于勘查酸性礦山廢水中的耐重金屬菌。棉殼二孢