SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息，歡迎咨詢上海曼博生物！也歡迎關(guān)注我們的公眾號：Mine-bio ，私信回復關(guān)鍵詞“PEI申請“即可申請PEI試用裝！用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀是為什么？SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。如想申請PEI試用裝，歡迎關(guān)注公眾號：Mine-bio，回復“申請PEI”，即可參加！高性價比PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率更好？

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。歡迎關(guān)注我們的公眾號：Mine-bio ，私信回復關(guān)鍵詞“PEI申請“即可申請PEI試用裝！

線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物，分子量25000，它能與核酸形成復合物，并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下，它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點：優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達質(zhì)粒（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞，轉(zhuǎn)染16h后，超過95%的細胞表達eGFP。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題，歡迎咨詢上海曼博生物。PEI轉(zhuǎn)染試劑的殘留檢測方法怎么開發(fā)?

瞬時轉(zhuǎn)染方法：1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。還有PEI試用裝申請活動，關(guān)注公眾號：Mine-bio，私信回復：PEI申請，即可參加PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種高分子化學類轉(zhuǎn)染試劑。血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑中國代理權(quán)

PEI轉(zhuǎn)染試劑會有毒性嗎？SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理

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