25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。5.轉(zhuǎn)染24h后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋10倍以上），在CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育過一晚。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！近期還可申請PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝！PEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢呢？25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于PolysciencesPEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例PEI轉(zhuǎn)染試劑是粉末的還是液體的？

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表1所示，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價比較高？

產(chǎn)品簡介：Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺（PEI轉(zhuǎn)染試劑）溶液，由PEIMAX配置而成，采用0.1umPES無菌過濾器，完全消除支原體污染風(fēng)險。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物，這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞，并且Transporter5-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用，有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究，可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲（SF9、SF21）等真核細胞系，可作用于大到135,000個核苷酸的質(zhì)粒，所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染。Transporter5可節(jié)省試劑準備時間，加快項目進度。經(jīng)過嚴格的性能檢測，確保品質(zhì)，在新藥研發(fā)過程中是一款快速、重復(fù)性好、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品特點：非GMP，研究級PEI轉(zhuǎn)染試劑溶液；高轉(zhuǎn)染效率；無縫過渡到MAXgeneGMP；易放大，可預(yù)測產(chǎn)量；用于工藝開發(fā)，臨床前和早期臨床研究。請關(guān)注我們的公眾號：Mine-bioPEI轉(zhuǎn)染試劑有沒有毒性？25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

誰知道Polysciences的轉(zhuǎn)染試劑怎樣？25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

化學(xué)轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學(xué)研究中常用的轉(zhuǎn)染方法，主要包括兩類：陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學(xué)分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。一方面使復(fù)合體整體帶上正電荷（多數(shù)細胞膜表面帶有弱的負電荷，通過電荷作用吸引復(fù)合體到細胞膜表面）；另一方面對線性的核酸進行濃縮，使其體積變小更易穿透細胞膜。陽離子聚合物類轉(zhuǎn)染試劑可以說是貧窮實驗室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的NatureProtocol上發(fā)表了PEI作為轉(zhuǎn)染試劑的詳細方法，到現(xiàn)在被越來越多的實驗室采用。更多關(guān)于PolysciencesPEI相關(guān)產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例