血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么

PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗。當(dāng)初試驗經(jīng)費很有限，被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000，選擇PEI，以至于相當(dāng)長的時間內(nèi)，轉(zhuǎn)染試驗都不順利。下面是幾點關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點：1. PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2. 轉(zhuǎn)染時，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中，順序不可錯，輕微混勻，靜止20 min3. 轉(zhuǎn)染后4小時，一定要換液！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因為PEI對細胞毒性太大4. 如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當(dāng)提高。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑可以轉(zhuǎn)染HEK293系列。血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么

對于接觸抑制敏感的細胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！進口PEI轉(zhuǎn)染試劑配置方法如何優(yōu)化PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染時的比例？

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！

方法：1．細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。2.制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測到報告基因的表達。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑主要用于大規(guī)模的蛋白表達和病毒包裝。

轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。5.轉(zhuǎn)染24h后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋10倍以上），在CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育過一晚。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！近期還可申請PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝！PEI轉(zhuǎn)染試劑會有毒性嗎？SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑使用注意事項

PEI轉(zhuǎn)染試劑使用的時候有什么注意事項？血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。更多關(guān)于PolysciencesPEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么