速溶型PEI轉染試劑如何儲存

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優(yōu)化。

用PEI轉染時，一般和DNA的比例是多少呢？速溶型PEI轉染試劑如何儲存

化學轉染方法是生物醫(yī)學研究中常用的轉染方法，主要包括兩類：陽離子脂質體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。一方面使復合體整體帶上正電荷（多數(shù)細胞膜表面帶有弱的負電荷，通過電荷作用吸引復合體到細胞膜表面）；另一方面對線性的核酸進行濃縮，使其體積變小更易穿透細胞膜。陽離子聚合物類轉染試劑可以說是貧窮實驗室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的Nature Protocol上發(fā)表了PEI作為轉染試劑的詳細方法，到現(xiàn)在被越來越多的實驗室采用。更多關于Polysciences PEI相關產(chǎn)品內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司！cGMP級PEI轉染試劑價格多少用PEI轉染試劑時，一般和DNA的比例是多少呢？

準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。

依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管。轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

瞬時轉染方法1.接種細胞：轉染前，用膠原酶消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表1所示，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管。更多關于Polysciences產(chǎn)品，歡迎咨詢上海曼博生物！哪個品牌的PEI轉染試劑比較好？

穩(wěn)定轉染方法1.接種細胞：轉染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

用PEI轉染時一般和DNA的比例是多少？科研級PEI轉染試劑市場報價

哪里有賣GMP等級的PEI轉染試劑？速溶型PEI轉染試劑如何儲存

穩(wěn)定轉染方法1.接種細胞：轉染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。更多Polysciences PEI產(chǎn)品歡迎咨詢上海曼博生物！速溶型PEI轉染試劑如何儲存

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