合肥珠海RNA提取試劑

昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法：將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液，室溫12000rmp離心半分鐘，棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液，室溫12000rmp離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中，加入50～100μLRNA洗脫液，室溫放置1～2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用RNA提取試劑注意事項(xiàng)：盡量不要對著RNA樣品說話，以防RNA酶污染。合肥珠海RNA提取試劑

昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法：RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子。注意：大部分昆蟲的28SRNA被切割成兩個(gè)小的片段，彼此用氫鍵相連，所以在甲醛變性膠中，沒有28S帶出現(xiàn)。RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5～10μLRNA溶于TE緩沖液中(pH7.5～8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。杭州重慶RNA提取試劑好的試劑盒價(jià)格比較貴，在實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要來定奪試劑盒的使用。

總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍普遍，可以從動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液會分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相，RNA分布在上清層中。收集上清層后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等

拭子RNA提取試劑的選擇？拭子樣本的量與提取的核酸量成正比，如果要提高核酸得率，也可通過增加樣本量來實(shí)現(xiàn)。一般先取一根拭子的涮洗液樣本，然后進(jìn)行提取，如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果，應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率（一根口腔拭子在口咽部來回刮擦10次）在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子，Biog試劑盒的提取得率在1-4ug，基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求。拭子RNA提取試劑的選擇？拭子樣本的量與提取的核酸量成正比，提高核酸得率，可通過增加樣本量來實(shí)現(xiàn)。

植物、動物、人類都存在RNA干擾現(xiàn)象，這對于基因表達(dá)的管理、參與對病菌傳染的防護(hù)、控制活躍基因具有重要意義。RNA干擾是一個(gè)生物過程，在這個(gè)過程中雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。自1998年發(fā)現(xiàn)以來，RNA干擾已經(jīng)作為一種強(qiáng)大的“基因沉默”技術(shù)而出現(xiàn)。RNA干擾作為研究基因運(yùn)行的一種研究方法已被普遍應(yīng)用于基礎(chǔ)科學(xué)，它可能在將來產(chǎn)生更多更新的醫(yī)治方法?？茖W(xué)家認(rèn)為，RNA干擾技術(shù)不僅是研究基因功能的一種強(qiáng)大工具，不久的未來，這種技術(shù)也許能用來直接從源頭上讓致病基因“沉默”，以醫(yī)治病癥甚至一些病，在農(nóng)業(yè)上也將大有可為。β-巰基乙醇主要破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。開封RNA提取試劑哪家便宜

RNA提取試劑注意事項(xiàng)：TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚，避免接觸皮膚或吸入。合肥珠海RNA提取試劑

RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實(shí)驗(yàn)方案會推薦，在異丙醇沉淀后，用乙醇沉淀兩次。實(shí)際上，任何提取實(shí)驗(yàn)，都會在純度和得率這一對矛盾中取舍。醇沉淀會將脂溶性雜質(zhì)去掉，但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會連同RNA一起被沉淀下來。因此，多整幾次，并不會讓RNA的純度翻倍，反而還會有降低得率的風(fēng)險(xiǎn)。一般情況下，異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是，倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低，那就只能放棄純度，在低溫沉淀數(shù)小時(shí)，以換來較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實(shí)驗(yàn)方案會推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水，以滅活RNase。這一點(diǎn)是要肯定的。不過，在使用DEPC的過程中，又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水，會有一股“香甜”的味道。許多人會以為那是殘留的DEPC而不敢用。實(shí)際上，這只是DEPC分解成CO2和乙醇后，產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。合肥珠海RNA提取試劑