蘇州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家

使用RFect系列小核酸轉(zhuǎn)染試劑做siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染測(cè)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1.細(xì)胞接種：一般做轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在接種/鋪板（細(xì)胞計(jì)數(shù)大約5*10^4cell/ml），使做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度在30-50%；如果細(xì)胞是原代細(xì)胞，接種密度可以密一些，細(xì)胞計(jì)數(shù)在2*10^6cell/ml；懸浮細(xì)胞可以在轉(zhuǎn)染當(dāng)天接種/鋪板（細(xì)胞計(jì)數(shù)大約5*10^4cell/ml），待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度30-40%。2.為了能在使用時(shí)有較好的轉(zhuǎn)染效果，靠前次使用建議您用24孔板做，每孔2ul轉(zhuǎn)染試劑即可。將較佳轉(zhuǎn)染條件（siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的用量、比例）放大到對(duì)應(yīng)的孔板即可。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。蘇州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家

懸浮型原代細(xì)胞：1）必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^(guò)增加培養(yǎng)液的黏度來(lái)幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是，以5ml為較低限度，否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對(duì)細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過(guò)快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞2）能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營(yíng)養(yǎng)成分消耗大，換液時(shí)間隔一般較短。蘇州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家只用于某些特定的細(xì)菌如豬傳染性腸胃炎細(xì)菌的培養(yǎng)。

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：轉(zhuǎn)染過(guò)程不可添加物品，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡；開(kāi)始實(shí)驗(yàn)siRNA的用量設(shè)置在終濃度10nM、30nM、50nM、100nM進(jìn)行摸索，后續(xù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果修改。RFectPM可用來(lái)轉(zhuǎn)染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞。對(duì)于大多數(shù)原代細(xì)胞，RFectPM的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率都在80%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%。RFectPM的使用也極其簡(jiǎn)便，先將sRNA與RFectPM室溫混合，再將siRNA-RFectPM混合物直接加入含培養(yǎng)基的細(xì)胞，血清對(duì)轉(zhuǎn)染效果沒(méi)有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)及常見(jiàn)問(wèn)題解答：傳代1、貼壁細(xì)胞傳代時(shí)，先用消化液潤(rùn)洗一遍；棄掉后，再加入適量消化液置于孵箱或鏡下觀察消化；當(dāng)細(xì)胞變圓，彼此之間產(chǎn)生空隙，加入等量或大量的培養(yǎng)基終止消化，培養(yǎng)基中的血清可以克制胰蛋白酶的活性。2、這里我沒(méi)有明確提到胰蛋白酶的濃度，并不是說(shuō)濃度越高越好。胰蛋白酶底物的特異性差，會(huì)破壞細(xì)胞膜成分。PH8.0，37度環(huán)境下，消化液的消化能力是較強(qiáng)的。培養(yǎng)基中的血清會(huì)降低胰酶的消化能力，所以每次消化前，也要用PBS反復(fù)沖洗干凈培養(yǎng)皿。日常用的比較多的消化液濃度：a)0.25%胰蛋白+0.02%EDTA。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)低，細(xì)胞之間的促生長(zhǎng)作用很小。

原代細(xì)胞的幾大特點(diǎn)：1、生命的起源原代細(xì)胞人體起源一個(gè)單細(xì)胞受精卵(*代干細(xì)胞)，經(jīng)歷卵裂(干細(xì)胞持續(xù)擴(kuò)增，增加細(xì)胞數(shù)量)、胚層出現(xiàn)(干細(xì)胞開(kāi)始分化出功能細(xì)胞)、組織部位形成(功能細(xì)胞的有序排列)及胚后發(fā)育這樣一個(gè)連續(xù)過(guò)程。2、維持人體動(dòng)態(tài)平衡的種子細(xì)胞人體通過(guò)干細(xì)胞化來(lái)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞更新。成年并不意味著細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化的結(jié)束，而仍然存在著受調(diào)控的組織更新過(guò)程。在一些組織中，如骨髓、表皮等，新細(xì)胞可不斷地產(chǎn)生，以補(bǔ)充因分化而衰老、死亡的細(xì)胞。干細(xì)胞的增殖保持著機(jī)體內(nèi)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞。蘇州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家

永生化細(xì)胞系通常具有更快的倍增時(shí)間并可持續(xù)地分裂。蘇州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家

原代細(xì)胞的培養(yǎng)和維持：(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的開(kāi)始培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的靠前步，是一項(xiàng)基本技術(shù)。原代細(xì)胞較接近和較能反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，適宜用于藥物敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。①組織塊培養(yǎng)法組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。蘇州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家