廣州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：血清A、DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)不能含血清，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。B、一般細(xì)胞對(duì)無(wú)血清培養(yǎng)可以耐受幾個(gè)小時(shí)沒(méi)問(wèn)題，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認(rèn)為會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對(duì)條件進(jìn)行優(yōu)化。C、對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的細(xì)胞，可以使用營(yíng)養(yǎng)豐富的無(wú)血清培養(yǎng)基，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。對(duì)血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑。有條件的話，可以用無(wú)血清培養(yǎng)基代替PBS洗細(xì)胞兩遍，注意洗的時(shí)候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細(xì)胞而是轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)板讓液體滾動(dòng)在細(xì)胞表面。如果洗的太厲害，細(xì)胞又損失一部分，加了脂質(zhì)體后，細(xì)胞受影響就更大了，死亡細(xì)胞會(huì)增多大部分外源DNA會(huì)被核酸酶降解或隨細(xì)胞分裂而稀釋。廣州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個(gè)大坑：1.不注意細(xì)節(jié)在轉(zhuǎn)染之前更換一次37℃預(yù)溫的培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率。脂質(zhì)體和DNA/RNA混合物應(yīng)當(dāng)一滴一滴地滴下來(lái)，從培養(yǎng)皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養(yǎng)皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細(xì)枝末節(jié)，但是，如果不注意的話，也會(huì)造成轉(zhuǎn)染效率低下。2.細(xì)胞狀態(tài)不好細(xì)胞狀態(tài)不好，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下。一般進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。如果是貼壁細(xì)胞的話，貼壁率應(yīng)該在70-80%；如果是懸浮細(xì)胞的話，應(yīng)該是6X105個(gè)/孔（24孔板），一般是轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在換液，轉(zhuǎn)染前用無(wú)血清培養(yǎng)基或PBS洗細(xì)胞一次。轉(zhuǎn)染的整個(gè)過(guò)程都不應(yīng)該有物品。溫州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的篩選：生長(zhǎng)的細(xì)胞比不分裂的細(xì)胞更快的受到GENETICIN物品的影響。轉(zhuǎn)染后，在開始篩選前等待48-72小時(shí)，使細(xì)胞表達(dá)足夠量的抗性酶，保證在開始篩選時(shí)可以自我保護(hù)。轉(zhuǎn)染后48-72小時(shí)倒掉培養(yǎng)基，加入含有GENETICIN物品的培養(yǎng)基，物品的濃度根據(jù)劑量反應(yīng)曲線確定，足夠殺死未轉(zhuǎn)染細(xì)胞。因?yàn)樵S多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度，包括細(xì)胞類型，培養(yǎng)基和血清濃度等，所以有必要對(duì)每種細(xì)胞作一個(gè)劑量反應(yīng)曲線，確定較佳濃度。篩選較多可能需要一周時(shí)間，因?yàn)樵谥滤绖┝康腉ENETICIN物品存在條件下，細(xì)胞會(huì)分裂1-2次。在次培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)使用較低劑量的物品，一般是篩選劑量的一半。篩選后的細(xì)胞一般是離散的克隆，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，可以分別純化（克?。?，收集進(jìn)行大量培養(yǎng)或染色并進(jìn)行抗性克隆的計(jì)數(shù)。

如何有效提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：1.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來(lái)確定較佳轉(zhuǎn)染條件。2.確保所構(gòu)建載體的質(zhì)量。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（細(xì)菌載體，質(zhì)粒DNA，RNA，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。細(xì)菌載體對(duì)特定宿主細(xì)胞傳染效率較高，但不同細(xì)菌載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細(xì)胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄細(xì)菌需侵染分裂期的宿主細(xì)胞，此外還需考慮一些安全問(wèn)題（如基因污染）。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)及大小對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對(duì)瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行，因此選擇組成或可調(diào)控，強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要，同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對(duì)照可排除毒性影響的干擾。直到外源基因在細(xì)胞分裂過(guò)程中因各種因素丟失為止。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染，你至少要掌握以下幾點(diǎn)：胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來(lái)越普遍?？煞譃樗矔r(shí)轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染等。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72h內(nèi)分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測(cè)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，通常需要一些選擇性標(biāo)記反復(fù)篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。對(duì)于真核生物，轉(zhuǎn)染就是原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞。蕪湖細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。廣州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個(gè)大坑：1.試劑過(guò)期有時(shí)候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會(huì)不會(huì)存在試劑過(guò)期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來(lái)是Lipofectamine2000過(guò)期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，盡量使用開封半年內(nèi)的，因?yàn)檫^(guò)了半年后，就算沒(méi)有過(guò)失效期，但是細(xì)胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬(wàn)不要為了省錢，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時(shí)加入血清，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時(shí)換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗(yàn)，其實(shí)也可以在原來(lái)的無(wú)血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個(gè)時(shí)候，較好不要換液，不要打擾細(xì)胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過(guò)早加入血清。過(guò)早的話，會(huì)引起未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞瘋狂生長(zhǎng)。廣州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷