南京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家推薦

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基清洗一次。5.加入混合液，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí)。6.到時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時(shí)~瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA。南京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家推薦

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：血清A、DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)不能含血清，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。B、一般細(xì)胞對(duì)無(wú)血清培養(yǎng)可以耐受幾個(gè)小時(shí)沒(méi)問(wèn)題，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認(rèn)為會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對(duì)條件進(jìn)行優(yōu)化。C、對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的細(xì)胞，可以使用營(yíng)養(yǎng)豐富的無(wú)血清培養(yǎng)基，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。對(duì)血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑。有條件的話，可以用無(wú)血清培養(yǎng)基代替PBS洗細(xì)胞兩遍，注意洗的時(shí)候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細(xì)胞而是轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)板讓液體滾動(dòng)在細(xì)胞表面。如果洗的太厲害，細(xì)胞又損失一部分，加了脂質(zhì)體后，細(xì)胞受影響就更大了，死亡細(xì)胞會(huì)增多珠海細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好其可降解性對(duì)體內(nèi)應(yīng)用也具有重要的意義。

影響轉(zhuǎn)染試驗(yàn)的因素：1.轉(zhuǎn)染試劑跟細(xì)胞系不匹配轉(zhuǎn)染試劑跟細(xì)胞系也是講究配合默契的，使用同一種試劑，不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同。但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過(guò)這些資料可選擇較適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然，較適合的是高效、低毒、方便、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑。因?yàn)橛行┘?xì)胞系是不穩(wěn)定的，可能隨著培養(yǎng)時(shí)間的改變，培養(yǎng)條件的不同，不同的選擇壓力，可能引起不同的克隆選擇。因此就算是同一個(gè)細(xì)胞系，在不同條件下轉(zhuǎn)染能力的差異可能會(huì)很大。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個(gè)大坑：1.試劑過(guò)期有時(shí)候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會(huì)不會(huì)存在試劑過(guò)期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來(lái)是Lipofectamine2000過(guò)期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，盡量使用開(kāi)封半年內(nèi)的，因?yàn)檫^(guò)了半年后，就算沒(méi)有過(guò)失效期，但是細(xì)胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬(wàn)不要為了省錢(qián)，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時(shí)加入血清，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時(shí)換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗(yàn)，其實(shí)也可以在原來(lái)的無(wú)血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個(gè)時(shí)候，較好不要換液，不要打擾細(xì)胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過(guò)早加入血清。過(guò)早的話，會(huì)引起未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞瘋狂生長(zhǎng)。那么，什么是較佳時(shí)機(jī)呢？在20%的細(xì)胞變圓的時(shí)候，就是加血清的較佳時(shí)機(jī)。由于脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時(shí)間一般不超過(guò)24小時(shí)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率影響因素：1.細(xì)胞密度一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%～80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率，過(guò)低或過(guò)高都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果。2.細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)這點(diǎn)非常關(guān)鍵，很多時(shí)候傳代次數(shù)太少或者太多都將導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細(xì)胞毒性，應(yīng)盡量使用適度傳代的細(xì)胞系，并在不同次實(shí)驗(yàn)時(shí)保持細(xì)胞傳代次數(shù)的一致性。3.細(xì)胞種類不同細(xì)胞種類的細(xì)胞在做轉(zhuǎn)染時(shí)所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。使用基質(zhì)珠做為固相支持可以使貼壁細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應(yīng)

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中。南京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家推薦

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對(duì)于真核細(xì)胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤(rùn)洗細(xì)胞。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競(jìng)爭(zhēng)性克制劑。另外，為了保證無(wú)血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長(zhǎng)，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量南京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家推薦