GlycOCATCH用于純化粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。它是基于無活性的Genovis的OpeRATOR?酶，該酶經(jīng)過工程改造，可以高親和力結(jié)合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的應用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學、復雜樣品的研究和生物制藥的表征。1. 粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽的特異性富集；2. 可靠 - 高親和力結(jié)合;3. 快速且易于使用的工作流程。不需要輔助因子或特殊緩沖液。GalNAcEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達，帶有His標簽，分子量為52 kDa。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程； 4. 即用型 - 只需加水即可！用于水解糖蛋白上GalNAc殘基的凍干酶。Genovis的GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰(zhàn)性，現(xiàn)有的O-糖釋放化學方法不太適合下游分析。湖南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

當在完整狀態(tài)下進行分析時，EPO的聚糖異質(zhì)性導致了非常復雜的質(zhì)譜圖。通過在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時，可以有效地去除 N 糖（含有PNGase F酶）和 O-糖，如對應于未修飾蛋白質(zhì)的單個峰所示。EPO上殘留了少量用乙?；僖核嵝揎椀腛-聚糖，因為OmniGLYZOR對這種結(jié)構(gòu)的水解效率低下。根據(jù)制造商Genvois的建議（在37°C下進行O/N孵育），兩種底物蛋白也用另一種市售的去糖基化產(chǎn)物處理，并顯示數(shù)據(jù)以供比較。另一方面，N-聚糖在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中翻譯地連接到未折疊的蛋白質(zhì)上。這導致某些 N-糖基化位點難以被 Genovis的PNGase F 接近，或者一旦底物蛋白折疊成其天然狀態(tài)，就根本無法接近。因此，這種N-聚糖的水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。湖南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究而不會用酶污染z終制劑，可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。

對Genovis的ImpaRATOR處理的樣品的分析表明，ImpaRATOR很好地消化了所有三種底物并產(chǎn)生了相似的糖肽，但預期的聚糖種類不同。用ImpaRATOR處理的樣品比其他樣品含有更多的變異，因為每種肽都檢測到多種聚糖結(jié)構(gòu)。觀察到的聚糖種類主要是單唾液酸化和二唾液酸化he心1結(jié)構(gòu)，這與依那西普的預期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO預處理樣品均產(chǎn)生具有裸核1結(jié)構(gòu)的肽，但攜帶在ImpaRATOR消化樣品中觀察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 預處理，然后用 ImpaRATOR 消化，得到含有 Tn 抗原的肽?？傊?，這些數(shù)據(jù)證明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。例如，OpeRATOR在兩個O-糖基化氨基酸之間消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱（數(shù)據(jù)未顯示）。

在這里，Genovis分析了 C1 抑制劑——一種人血漿衍生的生物zhiliao藥物，由 6 種 N-聚糖和多達 28 種 O-聚糖修飾，主要由唾液酸he心 1 結(jié)構(gòu)組成。在不對這種高度異質(zhì)的蛋白質(zhì)進行任何預處理的情況下，反相LC-MS分析產(chǎn)生了無法詳細解釋的復雜質(zhì)譜圖。在天然條件下使用OmniGLYZOR Microspin色譜柱，可在3小時內(nèi)有效去除所有O-聚糖。然而，蛋白質(zhì)上仍殘留著 1 到 3 個 N-聚糖。使用凍干的PNGase F和OmniGLYZOR試劑盒中包含的MS友好型RapiGest? SF表面活性劑*，在變性條件下通過額外的去糖基化步驟去除這些不可接近的N-聚糖。觀察到所有聚糖的完全去除，但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不會從變性中獲益，這就是為什么OmniGLYZOR Microspin色譜柱只能在非變性條件下使用的原因。PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一種糖酰胺酶，可水解內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。

Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物，用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接巖藻糖殘基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖結(jié)構(gòu)分析以及寡糖的外切糖苷酶陣列的寶貴工具。1. 高效α-巖藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖；2. 可靠的酶解增加了對外切糖苷酶陣列的信心；3. 可固定在即用型離心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的凍干酶。Genovis的FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于2mg糖蛋白的去碳基化。因此，其水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。吉林N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶

實現(xiàn)高通量 N-糖去除，簡化糖蛋白底物的下游分析。湖南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應條件在一小時內(nèi)有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當加入RapiGest?并在變性條件下進行反應時，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內(nèi)完全去除，PNGase F固定化15分鐘內(nèi)完全去除。在變性反應條件下，PNGase F 在 30 分鐘內(nèi)成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應條件，將常用的糖蛋白標準品RNase B在10或15分鐘內(nèi)完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。湖南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究