北京高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成，均帶有His標簽，組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 單位小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結合酶以提高效率； 3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！將混合物加載到GlycOCATCH上，洗滌樹脂，并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后，在RP-LC-MS上分離樣品。數(shù)據(jù)顯示，糖苷酸肽的選擇性純化，攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集：IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。胰蛋白酶消化IgA后，將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上，并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集，具有不同程度的糖基化。Genvois展示了使用兩種zhiliao蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能：依那西普和促紅xibao生成素 （EPO）。北京高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物。Genovis的SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于 2 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。用于水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶。 Genovis的SialEXO 2-3凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在500個單位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。 與唾液酸酶混合物 SialEXO 相比，SialEXO 2-3 是一種 α2-3 特異性唾液酸酶，允許對 α2-3 連接的唾液酸進行靶向分析。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小時內(nèi)實現(xiàn)。北京高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究將OglyZOR酶與依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或沒有 SialEXO 孵育 1 小時。

當在完整狀態(tài)下進行分析時，EPO的聚糖異質性導致了非常復雜的質譜圖。通過在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時，可以有效地去除 N 糖（含有PNGase F酶）和 O-糖，如對應于未修飾蛋白質的單個峰所示。EPO上殘留了少量用乙?；僖核嵝揎椀腛-聚糖，因為OmniGLYZOR對這種結構的水解效率低下。根據(jù)制造商Genvois的建議（在37°C下進行O/N孵育），兩種底物蛋白也用另一種市售的去糖基化產(chǎn)物處理，并顯示數(shù)據(jù)以供比較。另一方面，N-聚糖在內(nèi)質網(wǎng)中翻譯地連接到未折疊的蛋白質上。這導致某些 N-糖基化位點難以被 Genovis的PNGase F 接近，或者一旦底物蛋白折疊成其天然狀態(tài)，就根本無法接近。因此，這種N-聚糖的水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。

與PNGase F類似，Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括：OmniGlyZOR 微離心柱；PNGase F 凍干；RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性，否則某些 N-糖基化位點很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對EPO進行O-糖位點特異性消化：對于jin攜帶一個或幾個 O-糖基化位點的簡單底物蛋白，OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點。 PNGase F 以凍干粉的形式提供，裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中，分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。

用于水解離心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的 PNGase F 酶，用于在樣品中酶峰減少的糖蛋白上水解 N-糖。 將糖蛋白樣品與PNGase F一起在離心柱中固定，然后通過離心步驟輕松收集去糖基化的蛋白質。由于空間位阻，PNGase F對某些糖蛋白的活性可能緩慢或受到抑制 - 在這些情況下可能需要更長的孵育時間或糖蛋白變性。 Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3.z終樣品中的酶峰減少?，F(xiàn)O-糖基化藥有Tn抗原，定量he心 GalNAc 水平，減少了異質性。重慶N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供，包含4 個 GlycOCATCH。北京高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

Genovis的SialEXO產(chǎn)品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。這些酶對天然糖蛋白或游離的聚糖結構上存在的 N- 和 O-連接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前預處理O-糖基化蛋白。其他應用包括降低樣品復雜性、電荷異構體分析和外切糖苷酶陣列。N-連接、O-連接和游離聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸，增強對蛋白質電荷變體的分析可固定在即用型離心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白，并通過中級質譜分析。我們將該工作流程應用于依那西普的分析，雖然未經(jīng)處理的TNFR結構域過于復雜而無法分析，但O-聚糖組成可以在用PNGase F處理后進行分離和比較。北京高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究