上海微生物基因編輯技術(shù)服務(wù)開發(fā)

GoldenViewII吖啶橙核酸染料：高效、安全的核酸檢測選擇GoldenViewII吖啶橙核酸染料是一種新型的花青類核酸染料，可有效替代傳統(tǒng)的溴化乙錠（EB），廣泛應(yīng)用于核酸的檢測和染色。它在瓊脂糖凝膠電泳中表現(xiàn)出色，與核酸結(jié)合后能產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光信號，靈敏度比EB高出5-10倍。工作原理GoldenViewII通過與核酸的特異性結(jié)合發(fā)出熒光。與雙鏈DNA結(jié)合時(shí)，其熒光發(fā)射峰為530nm，呈現(xiàn)綠色熒光；而與單鏈DNA或RNA結(jié)合時(shí)，發(fā)射峰為640nm，呈現(xiàn)紅色熒光。這種特性使其不僅能用于DNA的檢測，還可用于RNA的染色。使用方法GoldenViewII的使用方法與EB相似，但具有更高的靈敏度和安全性。在瓊脂糖凝膠電泳中，將染料加入凝膠溶液中，冷卻后倒膠并進(jìn)行電泳。電泳結(jié)束后，可通過紫外透射儀或凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。優(yōu)勢與應(yīng)用GoldenViewII的主要優(yōu)勢在于其高靈敏度和低毒性。與EB相比，它在紫外光下的熒光強(qiáng)度更高，背景更清晰。此外，它還可用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA的染色，幫助研究細(xì)胞周期、凋亡和自噬等過程。GoldenViewII廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，如基因克隆、PCR產(chǎn)物分析和質(zhì)粒提取等。它不僅適用于常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳，還可用于熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測。PCR Master Mix (2×) (With Dye) 是一款專為快速、高保真PCR擴(kuò)增設(shè)計(jì)的即用型預(yù)混液提供了一種理想的解決方案。上海微生物基因編輯技術(shù)服務(wù)開發(fā)

熱敏感性雙鏈脫氧核糖核酸酶（ThermolabiledsDNase）的活性定義通常是指在特定的反應(yīng)條件下，酶能夠催化底物轉(zhuǎn)化的速率。具體來說，一個(gè)活性單位（U）定義為在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下，每分鐘導(dǎo)致OD260增加0.001（約每分鐘消化1pmol核酸底物）所需的酶量。也就是說，如果酶在25°C下，使用過量的高分子量DNA作為底物，在pH5.0的條件下，每分鐘在260nm處導(dǎo)致吸光度增加0.001，則該酶的活性定義為1個(gè)單位（U）。這種酶的特點(diǎn)是能夠在溫和的溫度下（例如37°C）高效地消化雙鏈DNA，同時(shí)對單鏈DNA和RNA沒有活性。此外，它具有熱敏感性，即在55°C下加熱5分鐘可以被完全且不可逆地滅活，這一特性使得它在去除RNA樣品中的基因組DNA污染后，可以很容易地被失活，避免對后續(xù)實(shí)驗(yàn)的干擾。天津重組蛋白表達(dá)服務(wù)技術(shù)服務(wù)開發(fā)基因編輯時(shí)需要用到pHCY-25A質(zhì)粒和sgRNA質(zhì)粒，我用的sgRNA質(zhì)粒是pHCY-163，編輯的菌株是大腸桿菌MG1655。

DNAMarkerVI：高效、精細(xì)的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DNAMarkerVI是一種即用型的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)，廣應(yīng)用于瓊脂糖凝膠電泳中，用于快速估算DNA片段的大小。它由6條線狀雙鏈DNA片段組成，覆蓋從250bp到10,000bp的范圍，能夠?yàn)镈NA分析提供清晰、準(zhǔn)確的分子量參考。產(chǎn)品特點(diǎn)組成：包含6條DNA片段，大小分別為250bp、1000bp、2500bp、5000bp、7000bp和10000bp。其中2500bp條帶濃度較高，顯示為加亮帶。即用型設(shè)計(jì)：已預(yù)混1×LoadingBuffer，可直接上樣，無需額外處理。清晰的條帶：電泳圖像清晰，背景干凈，條帶亮度均勻。穩(wěn)定性高：在-20℃下可長期保存，短期頻繁使用可置于4℃保存。使用方法上樣量：根據(jù)加樣孔的大小，每次取2-5μL直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中。電泳條件：推薦使用1.0%的瓊脂糖凝膠，電壓4-10V/cm，電泳時(shí)間20-30分鐘。染色與觀察：電泳結(jié)束后，使用溴化乙錠（EB）或其他DNA染料染色，在紫外燈下觀察。注意事項(xiàng)保存條件：建議低溫保存，避免反復(fù)凍融。瓊脂糖質(zhì)量：電泳時(shí)應(yīng)盡量選用高質(zhì)量的瓊脂糖，以獲得比較好分離效果。電泳緩沖液：及時(shí)更換電泳緩沖液并使用新制備的凝膠，以免影響電泳結(jié)果。

在逆轉(zhuǎn)錄過程中避免RNA降解，可以采取以下措施：1.**保持RNA完整性**：在合成cDNA前，通過凝膠電泳或微流控芯片技術(shù)對RNA完整性進(jìn)行評估。2.**減少RNA樣品反復(fù)凍融**：以防止降解。3.**遵守實(shí)驗(yàn)室的比較好操作慣例**：以避免RNase污染。4.**加入RNase抑制劑**：在建立逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)加入RNase抑制劑，以防止RNA降解。5.**使用無核酸酶的水**：使用確認(rèn)無核酸酶或DEPC（焦碳酸二乙酯）處理過的水，以確保無RNase。6.**存儲(chǔ)條件**：將RNA存儲(chǔ)于EDTA緩沖溶液中，以盡量減小由具有金屬離子輔酶因子的核酸酶造成的非特異性裂解。7.**選擇對RNA完整性影響小的基因組DNA去除方案**：在滅活/去除所使用的DNA酶的過程中，選擇對RNA完整性的影響小的方案。8.**考慮使用對已降解的RNA樣品高度有效的逆轉(zhuǎn)錄酶**：有些逆轉(zhuǎn)錄酶對已降解的RNA樣品也能進(jìn)行高效cDNA合成。9.**使用高質(zhì)量的RNA模板**：提取RNA時(shí)應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r組織材料用液氮迅凍后置于-80℃保存。10.**使用RNase-free的頭和離心管**：在RNA提取和處理過程中使用，避免RNA降解。11.**避免RNA樣品的人為污染**：實(shí)驗(yàn)人員的手為RNase的重要污染源，進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)始終戴手套，并應(yīng)勤換手套。重組膠原蛋?材料的理化特性表征需要對制備?藝、特性和?險(xiǎn)控制要求進(jìn)?嚴(yán)格的 監(jiān)控。

RNA上樣緩沖液簡介RNA上樣緩沖液是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中用于RNA電泳分析的一種輔助試劑。它通過提供適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)和條件，幫助RNA樣品在凝膠中有效遷移和分離。功能樣品沉降：增加樣品的密度，使其更容易沉入凝膠孔中。電泳指示：含有染料，如溴酚藍(lán)或二甲苯青，幫助觀察樣品遷移。樣品保護(hù)：在電泳過程中保護(hù)RNA分子，減少降解。使用方法樣品準(zhǔn)備：將RNA樣品與上樣緩沖液混合，通常按1:1的比例。變性處理：對于需要變性的電泳，樣品可與甲醛混合并加熱變性。上樣：將混合后的樣品加入凝膠孔中。電泳：在電場作用下進(jìn)行電泳，觀察RNA的片段的遷移。保存建議短期：4℃保存，可保持一個(gè)月。長期：-20℃保存，可延長有效期至兩年。注意事項(xiàng)：避免RNase污染：在處理RNA樣品時(shí)，必須使用無RNase的設(shè)備和耗材，避免RNA降解。操作安全：由于含有甲醛等有害成分，操作時(shí)應(yīng)佩戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備，如手套、口罩和防護(hù)眼鏡。染色和檢測：電泳結(jié)束后，可以使用溴乙錠（EtBr）或SYBRGold等核酸染料對凝膠進(jìn)行染色，然后在紫外光下觀察RNA條帶。RNA上樣緩沖液的使用可以確保RNA樣品在電泳過程中的穩(wěn)定性和均勻遷移，從而獲得準(zhǔn)確的電泳結(jié)果。DL1000 DNA Marker能夠?yàn)檠芯咳藛T提供準(zhǔn)確的分子量參考，幫助快速估算目標(biāo)DNA片段的大小。福建大腸桿菌表達(dá)技術(shù)服務(wù)臨床前研究

Pfu Master Mix (2x)(With Dye)高保真酶和優(yōu)化緩沖液支持長片段DNA的高效擴(kuò)增，適合基因組研究和復(fù)雜的PCR。上海微生物基因編輯技術(shù)服務(wù)開發(fā)

在分子生物學(xué)研究中，RNA的分離與分析是基因表達(dá)研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。然而，RNA的穩(wěn)定性較差，容易被RNase降解，因此在RNA電泳實(shí)驗(yàn)中，使用無RNase污染的緩沖液至關(guān)重要。BPTE電泳緩沖液(10×, RNase free)作為一種高效、穩(wěn)定的緩沖液，為RNA電泳提供了理想的條件。BPTE電泳緩沖液的主要成分包括PIPES、Tris和EDTA，這些成分共同作用，為RNA電泳提供了穩(wěn)定的pH環(huán)境和良好的導(dǎo)電性。該緩沖液經(jīng)過嚴(yán)格的RNase-free處理，確保在電泳過程中RNA不會(huì)被降解，從而保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。優(yōu)勢與特點(diǎn)無RNase污染：BPTE電泳緩沖液(10×, RNase free)經(jīng)過0.1% DEPC處理，確保無RNase污染，適合RNA樣品的電泳分析。高效分離：該緩沖液能夠提供穩(wěn)定的電泳條件，確保RNA條帶清晰、分辨率高，尤其適用于小片段RNA的分離。高濃度設(shè)計(jì)：10×的高濃度設(shè)計(jì)使得BPTE緩沖液在使用時(shí)可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求靈活稀釋，減少浪費(fèi)，降低實(shí)驗(yàn)成本。即用型配方：BPTE電泳緩沖液(10×, RNase free)為即用型溶液，無需額外配制，直接稀釋后即可使用，方便快捷。使用方法使用BPTE電泳緩沖液(10×, RNase free)時(shí)，需按照以下步驟操作：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，將10×BPTE緩沖液稀釋至1×工作液。