乳酸鐵營養(yǎng)瓊脂(Lactose Iron Nutrient Agar)是一種兼具選擇性、鑒別性與營養(yǎng)性的復合培養(yǎng)基,常用于食品、水質(zhì)及臨床標本中革蘭陰性腸道菌的快速分離與初步鑒定。其關鍵原理在于“雙指示”設計:乳糖作為可發(fā)酵碳源,與鐵鹽共同構(gòu)成判別系統(tǒng)——能發(fā)酵乳糖的菌株產(chǎn)酸,使酚紅指示劑由紅變黃;若同時產(chǎn)氣,則可在培養(yǎng)基內(nèi)形成氣泡或裂縫。而鐵離子的加入,讓具備硫化氫(H?S)生成酶的細菌(如某些變形桿菌、沙門氏菌)將硫代硫酸鈉還原,與Fe2?結(jié)合生成黑色FeS沉淀,菌落中心呈現(xiàn)特征性黑心,實現(xiàn)“一眼辨菌”。配方上,乳酸鐵營養(yǎng)瓊脂在營養(yǎng)瓊脂基礎上添加1%乳糖、0.02%硫代硫酸鈉與0.02%檸檬酸鐵銨,pH調(diào)至7.4±0.2,既保證腸桿菌科的基本營養(yǎng)需求,又通過高糖與鐵鹽抑制部分非目標菌的過度生長。傾注平板后呈淡紅色半透明,若室溫存放出現(xiàn)泛黃,說明培養(yǎng)基已酸化,需棄用。接種時,多采用分區(qū)劃線,35℃培養(yǎng)18–24小時即可讀取結(jié)果:乳糖發(fā)酵陽性菌(如大腸埃希菌)形成黃色、邊緣整齊的大菌落;乳糖陰性菌(如志賀菌)則保持紅色;若菌落中心發(fā)黑,則提示H?S陽性,需進一步做血清學或質(zhì)譜確認。其適生長溫度55–65 ℃,芽孢可耐100 ℃沸水2小時、紫外線輻照8小時仍存活,被廣用于檢驗高壓滅菌效果。抱川芽孢桿菌
赫氏埃希氏菌是深海熱液口的“化學魔術師”,能在攝氏百度、千倍大氣壓的暗夜里,把硫化氫當早餐,把二氧化碳當點心來款待。它用氫硫還氧酶把劇毒硫化氫拆成電子與質(zhì)子,驅(qū)動ATP合酶高速旋轉(zhuǎn),合成能量,再借逆三羧酸循環(huán)把無機碳織成有機糖,無需陽光,也能養(yǎng)活整片“黑煙囪”叢林??茖W家搭乘深潛器采集菌體,發(fā)現(xiàn)其細胞膜含特殊醚鍵脂質(zhì),像給自身裹上耐高溫的陶瓷瓦,蛋白質(zhì)內(nèi)部也布滿離子鍵,仿佛微型鋼鐵骨架,才讓它在沸水中依舊柔韌。實驗室里,研究團隊把它的固碳基因簇移植到工業(yè)大腸桿菌,使后者能在廢氣流里自養(yǎng)生長,產(chǎn)出的聚羥基脂肪酸酯可制可降解塑料,為碳中和提供新思路。小小赫氏埃希氏菌,用肉眼看不見的臂膀,托住地球深部與未來的綠色循環(huán)。氣味沙雷氏菌晝夜輸送給花生,畝產(chǎn)蛋白因此提升三成,農(nóng)戶少施20公斤尿素,卻多收一筐飽滿果仁。

MB培養(yǎng)基基礎(Marine Broth Base)是一種專為海洋細菌設計的富營養(yǎng)液體培養(yǎng)基,由蛋白胨、酵母粉及多種無機鹽組成,pH 7.2–7.6,滲透壓與海水相當。配方中氯化鈉濃度約2–3%,并補充鎂、鉀、鈣等海水中主要離子,可瞬時啟動依賴高鹽環(huán)境的嗜鹽菌與耐鹽菌,縮短延滯期。實驗室常規(guī)做法是將培養(yǎng)基干粉溶解于蒸餾水后,補加陳海水或人工海鹽,即可恢復接近自然海水的離子譜,使挑剔的海洋放線菌、弧菌、假單胞菌等迅速進入對數(shù)生長,用于后續(xù)分離、保藏或活性物質(zhì)篩選。由于海洋微生物常產(chǎn)色素、抗生物質(zhì)及胞外多糖,MB培養(yǎng)基的高營養(yǎng)特性可充分展現(xiàn)這些次級代謝潛能:弧菌在28℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)12小時,菌濃即可達10? CFU/mL,菌液呈乳白或淡粉;某些Planococcus則分泌墨藍色素,使整瓶培養(yǎng)液變?yōu)榈逅{,成為天然色素研究的理想起點。若需固體培養(yǎng),只需補加1.5%瓊脂,即成MBA平板,可在表面涂布沉積物懸液,28℃培養(yǎng)2–3天,挑取形態(tài)各異的單菌落進行16S rDNA鑒定,流程簡潔高效。在質(zhì)量控制方面,MB培養(yǎng)基需用人工海水或陳海水配制,切忌直接使用自來水,以免鈣鎂離子不足或氯殘留抑制菌體;滅菌后若出現(xiàn)沉淀,多為鎂鹽析出,可50℃水浴復溶,不影響使用。
包姜氏液體培養(yǎng)基基礎(BGA Broth Base)是為培養(yǎng)姜苗根莖共生促生菌而設計的富氮液體培養(yǎng)基,由包頭師范學院與姜科作物團隊共同優(yōu)化,故得“包姜”之名。其配方以酪蛋白胨與大豆木瓜酶消化物提供與緩釋氨基酸,酵母粉補充B族維生素和微量元素,可溶性淀粉作碳源,既避免葡萄糖過量產(chǎn)酸,又模擬根莖分泌物成分;特別添加0.3% K?HPO?與0.2% MgSO?,緩沖能力強,可中和菌體代謝酸,維持pH 6.8–7.0,滿足假單胞菌、芽孢桿菌及稀有放線菌的同步增殖。實際應用中,1 L培養(yǎng)基接種5 mL姜塊研磨液,28℃、160 r/min振蕩培養(yǎng)24 h,菌濃即可達2×10? CFU/mL,菌液呈淡棕、微粘,帶新鮮生姜清香;繼續(xù)補糖發(fā)酵可產(chǎn)胞外多糖1.2 g/L,對番茄、辣椒具明顯促根活性。若需固體分離,補加1.2%瓊脂即得BGA平板,可直觀觀察菌落形態(tài):有效菌株多呈乳白、邊緣波狀,48 h后在365 nm紫外下可見藍綠色熒光,與16S rDNA序列聯(lián)用,可在72 h內(nèi)完成“功能—種屬”雙重鑒定。質(zhì)量控制上,BGA培養(yǎng)基需用去離子水配制,高壓滅菌后若出現(xiàn)輕微沉淀,為鎂—磷復合物,50℃水浴搖勻即可;儲存過程若液體變黃,提示淀粉水解過度,應廢棄。對白絹、根腐、灰霉的抑制率超七成;同時誘導植物開啟系統(tǒng)抗性,番茄未染病就先“武裝”葉片。

異常嗜冷芽孢桿菌(Bacillus psychrodurans)是芽孢桿菌家族里的“極地居民”。它可在?2 ℃緩慢生長,更適溫度只15 ℃,比較高不超過30 ℃,卻能在南極凍土、深海沉積物中形成橢圓芽孢,耐?20 ℃冷凍和反復凍融,被視作研究低溫適應的模式菌之一。其“耐寒密碼”有三重:細胞膜富含支鏈和短鏈脂肪酸,保持流動性;冷休克蛋白Csp與RNA伴侶協(xié)同,防止核酸二級結(jié)構(gòu)凍結(jié);兼產(chǎn)低溫活性酶,在4 ℃仍具80 %活力,為冬季生物過程提供催化可能。在農(nóng)業(yè)上,菌株L-4分泌IAA 18 mg·L?1并溶磷2.3 mg·L?1,4 ℃下仍使冬小麥根長增25 %,返青期提前5天,分蘗數(shù)提高一成,相當于給作物“穿”上生物羽絨服。工業(yè)端,它的耐冷蛋白酶已在洗滌劑中試用,10 ℃洗衣去污力提升30 %,節(jié)能20 %;低溫淀粉酶可將糖化溫度由60 ℃降至35 ℃,為冬季酒精發(fā)酵省蒸汽、減碳排。環(huán)境修復方面,菌株ANT-1在?5 ℃、10 %鹽度下60天降解柴油60 %,為極地溢油、寒區(qū)輸油管泄漏提供原位生物修復方案。未來,借助合成生物學,把異常嗜冷芽孢桿菌的“冷酶+冷激”模塊植入生產(chǎn)菌,有望實現(xiàn)“零加熱”生物制造,讓微生物在冰水里也能為人類催化價值反應。小小嗜冷芽孢桿菌,用極端低溫下的生存智慧,把寒冷轉(zhuǎn)化為綠色科技的新動能。溫室試驗顯示,每畝用兩百克菌粉拌基質(zhì),黃瓜枯萎率降四成,農(nóng)藥少打一半,果實仍青亮。氣味沙雷氏菌
小小威氏芽孢桿菌,用微米之軀守護綠色豐收,讓農(nóng)藥瓶少一個,飯碗多一粒。抱川芽孢桿菌
特基拉芽孢桿菌(Bacillus tequilensis)是芽孢桿菌屬中一顆快速升起的新星。更早在墨西哥酒窖的橡木桶中被發(fā)現(xiàn),它可在60℃、8%乙醇或含砷10g/L的廢水中保持活性,芽孢能休眠十年不死,被視作“極端環(huán)境基因庫”。其抗逆機制由“吸附-代謝-固定”三級網(wǎng)絡組成:ArsR-arsB-arsC操縱子把As3?氧化為低毒As??并泵出胞外;組氨酸富集蛋白Teq可吸附Au3?、Cd2?,吸附量達50mg/g,使湖南砷污染稻田兩年可溶砷下降45%,稻米增產(chǎn)15%,籽粒砷低于國標一半。在農(nóng)業(yè)領域,特基拉芽孢桿菌表現(xiàn)出廣譜抑菌與促生雙重功效。菌株M408F10-3F8對12種病原菌和卵菌有強拮抗作用,黃瓜枯萎盆栽防效58%,與多菌靈相當,同時分泌IAA促生;菌株2-2a對大豆炭疽、黑斑、灰斑等葉部病害及根腐、立枯等土傳病害兼具防效,且定殖速度快;菌株20Q9B-2-14對馬鈴薯軟腐病菌抑制明顯,為生防制劑添新選項。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中,菌株ZSGD5與Bt-CO通過“異養(yǎng)硝化-好氧反硝化”低耗氧途徑,把氨氮、亞硝酸鹽迅速轉(zhuǎn)為氮氣逸出,5℃仍保持活性,可使斑節(jié)蝦、花白鰱池塘氨氮下降60%,換水量減少三成。抱川芽孢桿菌