無(wú)需添加肝素血小板裂解液過(guò)濾

通過(guò)BODIPY染色的脂肪滴來(lái)反映的成脂分化情況，發(fā)現(xiàn)兩種肝素UFH和LMWH在高濃度時(shí)，分化成脂細(xì)胞的百分比明顯降低。同樣的，通過(guò)茜素紅染色的磷酸鈣沉淀分析成骨分化情況，高濃度肝素也降低了成骨分化的百分比，特別是在脂肪組織來(lái)源的MSCs中，UFH肝素高濃度對(duì)成脂和成骨分化誘導(dǎo)的負(fù)面影響較為明顯?；谏鲜鼋Y(jié)果，我們現(xiàn)在知道血小板裂解液中添加的抗凝劑肝素在體外MSCs擴(kuò)增的必要性，在購(gòu)買(mǎi)血小板裂解液后，用戶(hù)應(yīng)結(jié)合自己的實(shí)驗(yàn)條件去合理的選擇合適的肝素濃度，而肝素濃度的選擇應(yīng)該在有效防止含血小板裂解液培養(yǎng)基凝膠形成的基礎(chǔ)上盡量降低，以減少肝素對(duì)于MSCs的增殖能力、成纖維細(xì)胞體外集落形成單位（CFU-F）、MSCs體外分化等的影響。更多關(guān)于Sexton血小板裂解液相關(guān)產(chǎn)品問(wèn)題，歡迎咨詢(xún)上海曼博生物！血小板裂解液中的沉淀是怎樣形成的？無(wú)需添加肝素血小板裂解液過(guò)濾

間充質(zhì)間質(zhì)細(xì)胞(MSCs)體外擴(kuò)增的培養(yǎng)基一般添加胎牛血清FBS，但是考慮到異種ganran及免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，監(jiān)管機(jī)構(gòu)并不鼓勵(lì)使用。人血小板裂解液除了不存在異種免疫反應(yīng)或牛病原體ganran的風(fēng)險(xiǎn)，有助于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增，也相對(duì)容易地根據(jù)良好的生產(chǎn)規(guī)范程序生產(chǎn)，并已用于臨床應(yīng)用，因此現(xiàn)如很多資料顯示血小板裂解液已被證明是擴(kuò)增MSCs一種非常有效的FBS替代方法（參考文獻(xiàn)1）。血小板裂解液由血漿組成，含有纖維蛋白原和凝血因子，對(duì)于一般細(xì)胞培養(yǎng)中涉及的含鈣培養(yǎng)基來(lái)說(shuō)通常需要加入抗凝劑（常用肝素、Rivaroxaban利伐沙班、argatroban阿加曲班等）來(lái)防止凝膠形成，其中肝素很為常用。更多關(guān)于Sexton人血小板裂解液的相關(guān)產(chǎn)品問(wèn)題，歡迎咨詢(xún)上海曼博生物！gamma射線(xiàn)輻照血小板裂解液哪個(gè)品牌好血小板裂解液和胎牛血清相比有什么優(yōu)勢(shì)？

本研究中使用的HPL是Stemulate公司兩款人源血小板裂解液（NH和H)是在工業(yè)規(guī)模(很小批量為20L)生產(chǎn)的，具備高度的批間一致性。將脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS進(jìn)行傳代培養(yǎng)11代。在DME/F-12中分別添加5、7.5或10%Stemulate-NH，并與10%胎牛血清進(jìn)行比較。羊膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞也在2.5或5%Stemulate中培養(yǎng)，與10%胎牛血清相比。牙髓來(lái)源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在DME/F-12中添加不同濃度的Stemulate-NH或Stemulate-H，并與添加10%FBS的培養(yǎng)基進(jìn)行比較。在所有實(shí)驗(yàn)中，每天都監(jiān)測(cè)細(xì)胞，每次傳代結(jié)束時(shí)，收獲細(xì)胞，并使用臺(tái)盼藍(lán)和一個(gè)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)然后繼續(xù)傳代。更多關(guān)于血小板裂解液的相關(guān)信息，歡迎咨詢(xún)上海曼博生物！也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，查看更多技術(shù)文章！

凍融循環(huán)后的穩(wěn)定性：對(duì)所有的血小板裂解液不建議反復(fù)凍融超過(guò)3次（包括初始解凍），次數(shù)過(guò)多會(huì)形成較多的碎片沉淀，影響性能，因此建議***次解凍時(shí)即進(jìn)行分裝。Sexton進(jìn)行了內(nèi)部研究，以檢查經(jīng)歷反復(fù)凍融循環(huán)的hPL的穩(wěn)定性。雖然數(shù)據(jù)是使用Stemulate作為測(cè)試血清收集的，但基于產(chǎn)品的相似成分和相似的放行規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)試結(jié)果同樣適用于nLivenPR和T-LivenPR。Sexton建議單瓶的hPL產(chǎn)品經(jīng)歷不超過(guò)三個(gè)冷凍/解凍循環(huán)，包括初始解凍。內(nèi)部數(shù)據(jù)顯示，在經(jīng)過(guò)多達(dá)三個(gè)冷凍/解凍循環(huán)時(shí)，pH、滲透壓、總蛋白或細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有顯著變化。然而，需要注意的是，單個(gè)單位hPL所經(jīng)歷的凍融循環(huán)次數(shù)越多，碎片形成的發(fā)生率就越高。建議客戶(hù)在其培養(yǎng)基產(chǎn)品中遇到碎片問(wèn)題時(shí)盡可能減少冷凍/解凍循環(huán)次數(shù)。此外，建議需要三次以上冷凍/解凍循環(huán)的客戶(hù)在初次解凍時(shí)進(jìn)行分裝。血小板裂解液進(jìn)口是不是很難的？

血小板裂解液解凍后請(qǐng)立即進(jìn)行培養(yǎng)基的配制，配置好的培養(yǎng)基在2-8°C環(huán)境下保存并盡快使用，不建議超過(guò)21天。如解凍后的原瓶無(wú)法全部使用，建議按需分裝成合適的小瓶中進(jìn)行-20°C保存一旦產(chǎn)品瓶或袋經(jīng)過(guò)初始解凍過(guò)程，建議盡快將產(chǎn)品置于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。盡管對(duì)于儲(chǔ)存在2-8°C的準(zhǔn)備好的含有hPL的培養(yǎng)基，Sexton的內(nèi)部測(cè)試有效期為21天，但建議客戶(hù)進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證研究，以確定其基于血小板裂解液的完整培養(yǎng)基的有效期。使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑等變量可能會(huì)縮短或延長(zhǎng)完整培養(yǎng)基產(chǎn)品的有效期。血小板裂解液使用的時(shí)候有什么注意事項(xiàng)嗎?gamma射線(xiàn)輻照血小板裂解液哪個(gè)品牌好

血小板裂解液用于無(wú)血清分離和傳代培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。無(wú)需添加肝素血小板裂解液過(guò)濾

人源性血小板裂解液具有快速擴(kuò)張的流行速度，很多生物技術(shù)行業(yè)公司開(kāi)始決定從胎牛血清過(guò)渡到血小板裂解液添加劑中。對(duì)于某些細(xì)胞類(lèi)型和產(chǎn)品，向血小板裂解物的轉(zhuǎn)變，如Sexton的無(wú)動(dòng)物源Stemulate產(chǎn)品，帶來(lái)更高效的細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)大和改善細(xì)胞表型。直到近期，血小板裂解液只能作為無(wú)任何病原減少技術(shù)的混合產(chǎn)品。在復(fù)雜的生物混合物中如血清或血小板裂解中引入PR的關(guān)鍵挑戰(zhàn)是，活性成分天生對(duì)PR技術(shù)敏感。在FBS、輻照或熱滅活產(chǎn)品性能大打折扣。為了解決這一差距，我們開(kāi)展了一個(gè)項(xiàng)目，研制一種PR處理的血小板裂解液，該裂解物可在成本降低的情況下維持恒定的性能。2018年，我們推出了nLivenPR，一種混合的人類(lèi)血小板裂解物，用經(jīng)驗(yàn)證的病毒風(fēng)險(xiǎn)降低輻照步驟。無(wú)需添加肝素血小板裂解液過(guò)濾