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細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環(huán)境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。在過去的幾十年中，科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液，并配合手工使細胞從4℃，-20℃，-80℃到液氮中逐步轉移使其達到“慢凍”的效果。但這種自制的凍存液儲存時間一般比較短，不能滿足時間跨度大的實驗項目的需求。且這樣人力和時間成本大，人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實驗結果帶來了不穩(wěn)定性。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：通用型，適用于凍存各種細胞系、原代細胞。廈門正規(guī)無血清細胞凍存液服務電話

細胞凍存：取出凍存管，注明細胞名稱，代數，日期。離心后，以無菌吸管吸棄上清，不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻，根據計數結果，將細胞總數調節(jié)成細胞數量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴密封口后，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1℃?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中，然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置，可以先將凍存管置于4℃30min，再-20℃凍存1h直至完全冷凍，再轉移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經冷凍的細胞轉移到液氮容器中，置于液氮上方的氣相空間中儲存。徐州正規(guī)無血清細胞凍存液直銷價無血清細胞凍存液產品特色：即用型，無需現配，即開即用。

細胞凍存注意事項：1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但為對數生長期細胞。在凍存前一日換一次培養(yǎng)液;2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍壞;3、凍存和復蘇用新配制的培養(yǎng)液。4、取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項特別重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致炸列。凍存液產品針對細胞凍存的特殊配方，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇率和活力。

無血清細胞凍存液使用方法：選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1）按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2）按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3）取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4）加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。5）將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6）直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃以下冰箱，長期冷凍保存。隨著細胞治好以及細胞儲存產業(yè)發(fā)展，細胞凍存也面臨從科研應用走向產業(yè)轉化。

如何提高細胞凍存成功率：無菌！無菌！無菌！要折騰嬌貴的細胞寶寶，必須要在無菌超凈環(huán)境下才行。超凈工作臺，所有的儀器用品提前滅菌，培養(yǎng)箱什么的定期用酒精擦干凈。微生物污染對細胞的影響經常是開始的時候沒發(fā)現，發(fā)現的時候已經結束了，所以千萬要小心。除了操作中的各種小細節(jié)，還有一個實驗雷區(qū)，就是配制細胞凍存液。常見的凍存液配制要遵循培養(yǎng)基+血清+DMSO的成分要求，根據細胞實際判斷成分配比，還建議使用程控儀，注意配制溫度，一個不小心就又會影響細胞的存活效果。含血清，細胞污染(細菌、霉菌和支原體等)的風險更高。唐山無血清細胞凍存液直銷廠家

無血清快速細胞凍存液，是一種新型的快速凍存細胞的保護液，可將細胞置于-80^C直接冷凍保存。廈門正規(guī)無血清細胞凍存液服務電話

細胞凍存注意事項：1、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。3、加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。廈門正規(guī)無血清細胞凍存液服務電話