研究方向甲基化含量鑒定作為表觀遺傳學(xué)研究中重要的一個研究方向——甲基化程度分析,現(xiàn)階段有不同的方法或技術(shù)來進行研究:如傳統(tǒng)的亞硫酸氫鹽處理后的克隆測序統(tǒng)計法、抗體檢測法、定量PCR檢測法等。這些方法皆因方法學(xué)的問題而不能獲得精確的定量,而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過對樣品的微滴化處理及目標(biāo)因子的***拷貝數(shù)定量,為甲基化程度的精確定量檢測提供了一種全新 的技術(shù)。*****的伴隨診斷常用體液來源(如血液,胸腹水,唾液及尿液等)的待檢標(biāo)本中的DNA,有正常脫落體細胞和病變脫落細胞兩種來源,前者的量遠大于后者。通過微液滴處理能在每個微液滴中有效減少正常體細胞DNA的干擾,實現(xiàn)**標(biāo)記物的有效檢測,如EGFR,ALK,ROS1,KRAS、BRAF等基因的突變檢測、乳腺*/胃*的HER2基因擴增檢測等,應(yīng)用于**精細醫(yī)學(xué)的伴隨診斷??:?上海)儀器科技有限公司是一家專業(yè)提供數(shù)字PCR 的公司,有需求可以來電咨詢!重慶重量輕數(shù)字PCR維修
數(shù)字PCR也叫DigitalPCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴增曲線循環(huán)Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。數(shù)字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標(biāo)分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統(tǒng)計并計算。相對而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。 西藏精密數(shù)字PCR電話數(shù)字PCR ,就選浚和(上海)儀器科技有限公司,讓您滿意,歡迎新老客戶來電!

與常規(guī)PCR方法相比,數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢:1、能夠***定量:常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA曲線,但是由于待檢樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線不在統(tǒng)一體系,條件上會存在差異,另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而數(shù)字PCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴增動力學(xué)影響,可進行***定量。2、樣本需求量低:適用于珍貴樣本或核酸降解嚴(yán)重的樣本。3、靈敏度高:數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個 PCR反應(yīng),這些反應(yīng)可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。4、高耐受性:由于目的序列被分配到多個 反應(yīng)體系中,***降低了背景信號和***物對反應(yīng)的干擾,擴增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。
dPCR的基本原理目前dPCR主要有兩種形式,芯片式和液滴式,但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度??梢允褂脦追N不同的方法來分配樣品,包括微孔板,毛細管,油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數(shù)量,根據(jù)泊松分布的原理,反應(yīng)體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算,從而解決了多個目標(biāo)分子存在于單個液滴中的可能性??:?上海)儀器科技有限公司為您提供數(shù)字PCR ,歡迎新老客戶來電!

無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率 。而精細有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時,可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當(dāng)厲害了??:?上海)儀器科技有限公司為您提供數(shù)字PCR ,有想法的可以來電咨詢!重慶重量輕數(shù)字PCR維修
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數(shù)字PCR(DigtalPCR)是一種核酸定量精密檢測的新興技術(shù)手段,源于于20世紀(jì)由Vogelstein等提出。它是將稀釋后的核酸模板分配到大量不同的反應(yīng)單元中,使每個反應(yīng)單元中有一個或沒有核酸。利用PCR擴增的同時,加入可檢測熒光。待擴增結(jié)束時,使用統(tǒng)計學(xué)方法采集每個反應(yīng)單元出現(xiàn)的熒光次數(shù),從而定量檢測樣本中的核酸濃度?;诜忠悍绞降牟煌瑪?shù)字PCR主要分為3種:微流體數(shù)字PCR、微滴數(shù)字PCR和芯片數(shù)字PCR,數(shù)字PCR儀器目前是市場測試校準(zhǔn)高的。重慶重量輕數(shù)字PCR維修
二代測序輔助建庫目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法,在均相溶液中,當(dāng)擴增引物增加時,由于擴增引物之間的相互作用,從而影響擴增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴增,將可降低引物間相互作用,提高擴增效率。同時還可以實現(xiàn)對于少量模板的有效擴增,得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明,是基因編輯技術(shù)的一大突破,但如何驗證實驗是否成功,仍需要高靈敏度的檢測方法,數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測,但精確定量評估時仍采取了數(shù)字PCR進行確認。浚和(...
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