大多數(shù)商業(yè)zhiliao性抗體屬于IgG類，在Fc結(jié)構(gòu)域中含有N-聚糖。一個(gè)重要的關(guān)鍵質(zhì)量屬性是糖基化曲線，因?yàn)樗鼤?huì)影響穩(wěn)定性、溶解度、藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特性。這種翻譯后修飾可能發(fā)生在生物工藝開發(fā)和制造過程中，因此需要密切監(jiān)測(cè)。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體（mAb）的分析工具。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc/2片段。單個(gè)FabRICATOR消解位點(diǎn)和質(zhì)量譜的后續(xù)精度使Fc糖基化譜能夠檢測(cè)，從而可以監(jiān)測(cè)批次間的一致性和其他關(guān)鍵質(zhì)量屬性。瑞典生物技術(shù)公司Genovis提供IdeS蛋白酶等，用于mAb、ADC藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同時(shí)消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進(jìn)行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過與 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化，在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中，F(xiàn)ab很容易通過降低pH洗脫。使用該試劑盒，可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時(shí)提供IdeS酶的純化試劑盒。甘肅FabULOUSIdeS蛋白酶抗體酶切剩下一個(gè)連接子殘基（甘氨酸殘基），這有助于識(shí)別位于Fc區(qū)域的修飾。

Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發(fā)的目的，并隨時(shí)準(zhǔn)備使用，只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應(yīng)用于更高的通量和自動(dòng)化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時(shí)可用的旋轉(zhuǎn)柱中，這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶，這可能是有利的。 對(duì)于更多的制備應(yīng)用，我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒，這是IgG片段生成和純化的強(qiáng)大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的，F(xiàn)(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵，如果片段想用于結(jié)合研究，這一點(diǎn)尤為重要，因?yàn)榻Y(jié)合效率和免疫反應(yīng)性將被保留。

與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時(shí)內(nèi)完成，并且由于酶的特異性，如果孵育時(shí)間延長(zhǎng)，則不存在過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性?；钚允窃?7°C下，但也可以在室溫下使用增加孵育時(shí)間進(jìn)行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個(gè)單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1。并通過反相LC-MS進(jìn)行分析，消化產(chǎn)生均勻的Fab和Fc片段。

與IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點(diǎn)是人IgG1三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會(huì)出現(xiàn)額外的消化位點(diǎn)。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性，并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑（2mM半胱氨酸）與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物，研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應(yīng)，并鑒定翻譯后修飾。LC-MS中級(jí)分析用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。浙江GlycINATORIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis將固定化酶固定在磁珠上，用于在鉸鏈下方自動(dòng)消化 IgG。IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

大多數(shù)zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架，雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性，例如單價(jià)結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對(duì)Fc糖基化。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產(chǎn)量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性，它在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1，并產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性，通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實(shí)現(xiàn)了完全消化，包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗(yàn)證了其在生物制藥開發(fā)中的用途。IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切