1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中的逆轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,RT)具有一個(gè)關(guān)鍵特性:它們通過(guò)特定的突變消除了RNaseH活性。RNaseH是一種通常與某些逆轉(zhuǎn)錄酶相關(guān)的酶活性,它能夠降解RNA。然而,在1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中,逆轉(zhuǎn)錄酶被設(shè)計(jì)成不具有這種降解RNA的能力,從而在合成cDNA的鏈時(shí)保護(hù)RNA模板不被降解。以下是1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程的一般步驟,以及如何避免RNA降解:1.**RNA模板準(zhǔn)備**:首先確保RNA模板的純度和完整性,避免DNA污染??梢酝ㄟ^(guò)DNaseI處理去除RNA樣品中的DNA污染。2.**混合反應(yīng)組分**:將RNA模板、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)、逆轉(zhuǎn)錄引物(如oligo(dT)或隨機(jī)引物)和緩沖液混合。3.**逆轉(zhuǎn)錄酶添加**:加入經(jīng)過(guò)突變處理的逆轉(zhuǎn)錄酶,這種酶缺乏RNaseH活性,因此不會(huì)在合成過(guò)程中降解RNA。4.**逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)**:在適宜的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),逆轉(zhuǎn)錄酶根據(jù)RNA模板合成cDNA鏈。5.**終止反應(yīng)**:通過(guò)加熱至一定溫度來(lái)終止逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。通過(guò)測(cè)序或基于PCR的方法(如T7E1酶切和測(cè)序)來(lái)驗(yàn)證gRNA的編輯效率,篩選出效率高的gRNA序列 。Recombinant Human GPC3/Glypican 3 Protein,His Tag

脫氧腺苷三磷酸(Deoxyadenosinetriphosphate,dATP)是一種去氧核苷酸三磷酸,它是DNA合成和復(fù)制過(guò)程中必需的原料之一。dATP的結(jié)構(gòu)與腺苷三磷酸(ATP)相似,但dATP的五碳糖2號(hào)碳上缺少一個(gè)-OH基,取而代之的是一個(gè)氫原子。dATP是四種dNTPs(脫氧核糖核苷酸三磷酸)之一,四種dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP,它們分別對(duì)應(yīng)DNA中的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤和胸腺嘧啶。dATP的化學(xué)式為C10H16N5O12P3,分子量為491.182,CAS登錄號(hào)為1927-31-7。在實(shí)驗(yàn)室中,dATP通常以100mM的濃度提供,用于各種分子生物學(xué)技術(shù),如PCR、DNA測(cè)序和分子克隆技術(shù)。dATP溶液需要在低溫條件下保存,通常是-20℃,以保持其穩(wěn)定性和活性。在DNA測(cè)序中,dATP與ddATP一起使用,ddATP是dATP的衍生物,它缺少3'-OH基團(tuán),用于Sanger測(cè)序中的鏈終止反應(yīng)。在PCR中,dATP作為DNA聚合酶的底物,用于合成新的DNA鏈。dNTPs的濃度在PCR反應(yīng)中非常重要,適當(dāng)?shù)臐舛扔兄跍p少錯(cuò)配和提高擴(kuò)增效率。通常,四種dNTPs以等濃度混合使用,以減少PCR過(guò)程中的錯(cuò)配誤差。在某些情況下,根據(jù)目標(biāo)序列的長(zhǎng)度和組成,可能需要調(diào)整dNTPs的濃度,以優(yōu)化PCR反應(yīng)。Recombinant FITC-Labeled Human FOLR1 Protein,His-Avi Tag在某些疾病中,特定蛋白質(zhì)的泛素化水平可能發(fā)生變化,因此,泛素化蛋白質(zhì)可以作為疾病的生物標(biāo)志物。

合成互補(bǔ)DNA(cDNA)的試劑盒是一種實(shí)驗(yàn)室工具,用于從RNA模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程合成DNA。逆轉(zhuǎn)錄是一種酶促反應(yīng),其中RNA模板被逆轉(zhuǎn)錄酶(一種特殊的DNA聚合酶)讀取,并根據(jù)RNA序列合成一條互補(bǔ)的DNA鏈。這個(gè)過(guò)程在分子生物學(xué)研究中非常重要,因?yàn)樗试S科學(xué)家從RNA樣品中獲取遺傳信息,并進(jìn)行進(jìn)一步的分析和應(yīng)用。cDNA合成試劑盒通常包含以下關(guān)鍵組分:1.**逆轉(zhuǎn)錄酶**:一種特殊的酶,能夠以RNA為模板合成DNA鏈。例如,M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶是一種常用的逆轉(zhuǎn)錄酶。2.**RNase抑制劑**:一種蛋白質(zhì),可以防止RNA樣品在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被環(huán)境中的RNase酶降解。3.**緩沖液**:提供適宜的化學(xué)環(huán)境,保證逆轉(zhuǎn)錄酶的活性和反應(yīng)的順利進(jìn)行。4.**dNTPs**:四種去氧核苷酸三磷酸(dATP、dCTP、dGTP和dTTP),是合成DNA鏈的原料。5.**引物**:短的單鏈DNA或RNA基礎(chǔ)片段,用于啟動(dòng)cDNA的合成。常見(jiàn)的引物類型包括oligo(dT)引物(針對(duì)mRNA的poly(A)尾)、隨機(jī)引物或特異性引物。6.**水**:通常是無(wú)核酸酶的水,以避免樣品被污染。
1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程是將RNA模板轉(zhuǎn)換成cDNA的過(guò)程。這個(gè)過(guò)程通常包括以下幾個(gè)步驟:模板RNA的準(zhǔn)備:確保RNA模板的質(zhì)量和純度,可能需要使用DNase I來(lái)去除RNA樣品中的DNA污染。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的配制:根據(jù)試劑盒的說(shuō)明,將RNA模板、引物(如Oligo(dT)、隨機(jī)六聚體或基因特異性引物)、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶和緩沖液等組分混合在一起。逆轉(zhuǎn)錄酶的啟用:如果需要,可能要將反應(yīng)體系預(yù)熱到一定溫度以達(dá)到逆轉(zhuǎn)錄酶。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):在適宜的條件下,逆轉(zhuǎn)錄酶會(huì)根據(jù)RNA模板合成一條互補(bǔ)的DNA鏈。這個(gè)過(guò)程通常在一定的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行,以保證酶的活性和反應(yīng)的效率。反應(yīng)的終止:逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)完成后,通常通過(guò)加熱到較高溫度來(lái)終止反應(yīng),以防止cDNA的進(jìn)一步合成。產(chǎn)物的純化:合成的cDNA可能需要通過(guò)某些方法(如柱層析或沉淀)進(jìn)行純化,以去除未反應(yīng)的dNTPs、RNA模板和酶等。cDNA的檢測(cè)和應(yīng)用:合成的cDNA可以用于后續(xù)的PCR、qPCR、克隆、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。泛素蛋白在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解的作用,通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑標(biāo)記蛋白質(zhì),被蛋白酶體識(shí)別并降解。

5'DNA腺苷酰化試劑盒的適用性非常廣,主要包括以下幾個(gè)方面:1.**miRNA克隆**:該試劑盒可用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆時(shí),3'端添加接頭的制備。2.**高通量測(cè)序建庫(kù)**:在高通量測(cè)序中,該試劑盒可用于制備5'端腺苷?;揎椀膯捂淒NA,這些DNA可以用于測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建。3.**PCR檢測(cè)**:在PCR檢測(cè)中,該試劑盒可以幫助制備具有特定5'端修飾的DNA片段,以適應(yīng)某些PCR應(yīng)用的需求。4.**單鏈DNA或RNA的5'端腺苷?;?*:試劑盒可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA或單鏈RNA轉(zhuǎn)換成5'端腺苷酰化DNA或RNA,無(wú)論3'端是否進(jìn)行了氨基化等封閉。5.**環(huán)狀DNA生成**:在不存在ATP的條件下,5'DNA/RNAAdenylase可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA生成環(huán)狀DNA。6.**RNALigation**:該試劑盒包含的MthRNA連接酶,可以用于RNA的連接反應(yīng),尤其是在需要5'端腺苷酰化DNA作為連接接頭時(shí)。7.**科研實(shí)驗(yàn)**:所有提到的產(chǎn)品信息都明確指出,5'DNA腺苷?;噭┖杏糜诳蒲袑?shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途。全長(zhǎng)跨膜蛋白A2AR,也就是腺苷受體A2aR(ADORA2A),是一種七次跨膜蛋白,屬于G蛋白偶聯(lián)受體。Recombinant Mouse IGFBP-3R Protein,hFc Tag
重組人泛素是一種蛋白質(zhì),它是一種含有76個(gè)氨基酸的高度保守的蛋白質(zhì),存在于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。Recombinant Human GPC3/Glypican 3 Protein,His Tag
重組酶是一類能夠促進(jìn)DNA分子之間同源或非同源序列的重組的酶。它們?cè)诜肿由飳W(xué)、遺傳工程和細(xì)胞生物學(xué)中扮演著重要角色。重組酶的作用機(jī)制通常涉及識(shí)別特定的DNA序列,催化DNA鏈的斷裂和重新連接,從而實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重組。重組酶的主要類型和功能包括:1.限制性內(nèi)切酶**(RestrictionEnzymes):這些酶可以識(shí)別特定的DNA序列并在這些序列處切割DNA鏈。它們是基因工程中常用的工具,用于DNA片段的精確切割和克隆。2.連接酶(Ligases):連接酶可以將兩個(gè)DNA片段連接在一起,形成穩(wěn)定的DNA分子。在DNA克隆和修復(fù)過(guò)程中,連接酶用于封閉切割位點(diǎn)產(chǎn)生的缺口。3.整合酶(Integrases):整合酶能夠?qū)⒁欢蜠NA序列插入到宿主基因組的特定位置。它們?cè)诨蚝瓦z傳工程中具有應(yīng)用。4.轉(zhuǎn)座酶(Transposase):轉(zhuǎn)座酶可以催化DNA片段從一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置,這種機(jī)制在基因組中存在,并且在遺傳多樣性和進(jìn)化中起著作用。5.**重組酶**(Recombinases):如RecA蛋白和Rad51蛋白,它們?cè)谕粗亟M中發(fā)揮作用,促進(jìn)DNA雙鏈斷裂的修復(fù)和遺傳物質(zhì)的重組。6.DNA聚合酶:這類酶在DNA復(fù)制和修復(fù)中添加新的核苷酸,以現(xiàn)有DNA鏈為模板合成新的DNA鏈。
重組人KIR2DL3蛋白(Recombinant Human KIR2DL3 Protein, His-Avi Tag)是一種重要的免疫調(diào)節(jié)受體,屬于殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(Killer-cell Immunoglobulin-like Receptor, KIR)家族,主要表達(dá)于自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)和部分T細(xì)胞亞群表面。KIR2DL3通過(guò)識(shí)別并結(jié)合靶細(xì)胞表面特定的HLA-C分子,傳遞抑制性信號(hào),從而抑制NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性,在維持免疫耐受、抗病毒免疫及腫瘤免疫監(jiān)視中發(fā)揮關(guān)鍵作用。該重組蛋白采用真核表達(dá)系統(tǒng)(如HEK293細(xì)胞)制備,確保了其天然構(gòu)象和生物活性。其N端融合了His標(biāo)簽,便...