質(zhì)粒DNA提取后的儲存條件對于保持其活性至關(guān)重要。以下是一些推薦的儲存方法:1.**干燥保存**:質(zhì)粒DNA以干粉狀態(tài)保存是比較好的方法。如果總DNA以溶液形式保存,可以使用1×TE緩沖液稀釋,且TE緩沖液的pH值應(yīng)為8.0-8.5之間。2.**低溫保存**:植物總DNA低溫保存比較好在-80℃以下或液氮保存。如果沒有條件,也可以在-20℃保存??侱NA應(yīng)避免經(jīng)常凍融,同時建議每份樣品保存3-5個樣本??侱NA提取后保存的時限通常較組織要長(>兩年),但若長期保存,每隔兩年應(yīng)抽測,對不符合使用要求的DNA進行更新。3.**避免反復凍融**:反復凍融會破壞DNA的完整性和活性,因此應(yīng)盡量避免。4.**使用保護劑**:化學添加劑如二甲基亞砜(DMSO)可以防止DNA單鏈斷裂,但因其毒性和使用量的問題,并不是理想的保護劑。5.**封裝技術(shù)**:通過封裝技術(shù)保存DNA,可以隔絕外界水、氧氣和光等可能影響DNA穩(wěn)定的因素。例如,DNAshell®技術(shù)基于密封的不銹鋼微型膠囊,在惰性氣氛下,給予DNA干粉保護。6.**使用穩(wěn)定劑**:一些天然的雙糖,如海藻糖,被認為是一種多功能的保護劑,可以保護生物體免受冷凍、加熱等不利條件的影響。Tn5 轉(zhuǎn)座酶由兩個化學性質(zhì)相同的單體組成二聚體,每個單體主要有三個結(jié)構(gòu)域,包括 N 端的 α 螺旋結(jié)構(gòu)域。Myelin Basic Protein (MBP) (synthetic)

牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)在實驗室中的使用主要涉及以下幾個步驟:1.**DNA載體連接**:-牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I可以用于DNA載體連接,特別是在TOPO克隆載體制備中。它能夠識別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],并與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復合物,遇到DNA的5’-OH基團后,重新連接形成完整DNA鏈。2.**接頭連接**:-在NGS建庫中,牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I可用于接頭連接。這包括將含有特定序列的接頭A和接頭B與酶一起孵育,以實現(xiàn)DNA片段的連接。3.**操作步驟**:-**質(zhì)粒解旋**:將超螺旋質(zhì)粒DNA與牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I混合,在37°C下孵育5-15分鐘,以實現(xiàn)質(zhì)粒的解旋。-**接頭連接**:將接頭A(含CCCTT序列)和接頭B(含5’OH)與牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I混合,在37°C下孵育5-15分鐘,以實現(xiàn)接頭的連接。4.**注意事項**:-雙鏈接頭A通常5’端做NH2封閉修飾,以防止自連接;接頭A的CCCTT后通常包含5-12bp尾巴,再長的尾巴會導致連接效率大幅下降。-雙鏈接頭B的5’端必須包含-OH。-由于該酶應(yīng)用廣,在不同的實驗中使用策略不同,需要靈活運用,并根據(jù)具體文獻進行調(diào)整。
Recombinant Human PRL-3/PTP4A3 Protein,His TagUracil-DNA Glycosylase (UDG) 是一種在DNA修復過程中起作用的酶,其主要功能是識別并去除DNA中的尿嘧啶堿基。

提取的病毒核酸可以直接用于多種實驗,主要包括:1.**實時熒光定量PCR(qPCR)**:這是一種常用的技術(shù),可以對病毒核酸進行定量檢測。它通過實時監(jiān)測PCR過程中的熒光信號來確定病毒核酸的數(shù)量。例如,病毒核酸檢測就是基于此技術(shù),通過設(shè)計特異性引物和探針,對病毒的靶基因進行定性檢測。2.**逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)**:這項技術(shù)用于檢測RNA病毒,通過將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后進行PCR擴增,以檢測病毒的存在。RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣,可以用于檢測細胞、組織中RNA病毒的含量。3.**等溫擴增法**:包括環(huán)介導的等溫擴增(LAMP)和切口延伸等溫擴增(NEAR),這些方法在恒溫條件下進行,無需復雜的設(shè)備,適用于快速、現(xiàn)場的病毒核酸檢測。4.**數(shù)字PCR(dPCR)**:這是一種高度靈敏的技術(shù),可以對病毒核酸進行定量。它通過將樣本分配到成千上萬的微小反應(yīng)室中,每個反應(yīng)室單獨進行PCR擴增,從而實現(xiàn)對病毒核酸的精確計數(shù)。5.**核酸雜交技術(shù)**:如熒光原位雜交(FISH),可以用于檢測特定病毒核酸序列在細胞或組織中的存在和定位。
蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase)是一種特殊的融合蛋白,它結(jié)合了蛋白A和微球菌核酸酶(MNase,MicrococcalNuclease)的特性。以下是pA-MNase的一些關(guān)鍵特點和應(yīng)用:1.**融合表達產(chǎn)物**:pA-MNase是蛋白A與微球菌核酸酶MNase的融合表達產(chǎn)物,因此它同時具有ProteinA的抗體結(jié)合活性和MNase的核酸內(nèi)切酶活性。2.**雙重功能**:由于其雙重功能,pA-MNase常用于蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究,特別是在ChIC(ChromatinImmunocleavage)和CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)技術(shù)中。3.**ProteinA的特性**:ProteinA是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的細胞壁表面蛋白,分子量為42kDa,能特異性地與哺乳動物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)結(jié)合,通常結(jié)合部位為免疫球蛋白的Fc區(qū)。4.**微球菌核酸酶(MNase)的特性**:MNase是一種核酸內(nèi)切酶,能夠降解核酸,常用于降解蛋白質(zhì)制備中存在的核酸,減少細胞裂解液的粘度,以及用于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析和快速RNA測序。5.**反應(yīng)條件**:MNase的反應(yīng)條件包括1XMicrococcalNucleaseReactionBuffer,需要補充100μg/ml重組白蛋白,分子生物學級,并在37°C下孵化。Ultra-Long Master Mix 在分子生物學實驗中的應(yīng)用主要集中在需要擴增長片段DNA序列的場合。

磁珠法提取的DNA通常指的是通過磁珠吸附技術(shù)從樣本中純化得到的核酸,而基因組DNA(gDNA)是指一個生物體細胞核中包含的全套遺傳信息的DNA。兩者的主要區(qū)別在于:1.**來源和組成**:-磁珠法提取的DNA可以是基因組DNA,也可以是質(zhì)粒DNA、線粒體DNA等其他類型的DNA。它是一個廣的概念,指的是通過磁珠法技術(shù)提取的任何類型的DNA。-基因組DNA特指一個生物體細胞核中的DNA,包含了所有的基因信息,以及可能的非編碼區(qū)域。它通常包含了大量的堿基對,如人類基因組由大約30億個堿基對組成。2.**純度和應(yīng)用**:-磁珠法提取的DNA的純度和質(zhì)量取決于提取過程中的裂解、吸附、洗滌和洗脫步驟,以及磁珠的質(zhì)量和操作條件。高質(zhì)量的磁珠法提取的DNA可以用于多種分子生物學實驗,如PCR、克隆、測序等。-基因組DNA的提取通常需要考慮其完整性和純度,以確保后續(xù)實驗的準確性?;蚪MDNA提取的難點在于血液樣本成分復雜,且白細胞體積占比低,因此提取純化難度較高。3.**提取方法**:-磁珠法提取DNA是一種高效、快速的核酸提取技術(shù),它利用磁珠表面修飾的特定官能團與核酸的特異性結(jié)合,通過外加磁場實現(xiàn)核酸與雜質(zhì)的快速分離。通過優(yōu)化crRNA的設(shè)計,可以提高FnCas12a的特異性和靈敏度,例如在microRNA檢測中 。Recombinant Rhesus macaque KIR3DL2 Protein,His Tag
Pfu DNA Polymerase在基因克隆中的應(yīng)用:Pfu DNA Polymerase常用于基因克隆,確保DNA片段的高精度復制。Myelin Basic Protein (MBP) (synthetic)
嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)是一種熱穩(wěn)定的酶,它在高溫下(55-65°C)仍然保持活性,這使得它在分子生物學實驗中非常有用,尤其是在需要高溫反應(yīng)的實驗中,如熱循環(huán)擴增(PCR)。BstDNAPolymeraseI具有以下特性:1.**熱穩(wěn)定性**:BstDNAPolymeraseI在高溫下具有較高的穩(wěn)定性,適用于高溫反應(yīng)的實驗,如PCR。2.**3'到5'外切酶活性**:這種酶具有3'到5'外切酶活性,能夠切除DNA末端上的非特異性引物和雜交DNA,使其成為等溫擴增應(yīng)用的理想酶。3.**耐鹽性**:BstDNAPolymeraseI在高鹽條件下仍能保持穩(wěn)定活性,這在一些特殊的PCR應(yīng)用中非常有用。4.**等溫擴增**:由于其3'到5'外切酶活性,BstDNAPolymeraseI用于等溫擴增反應(yīng),如LAMP技術(shù),這種技術(shù)能夠在恒溫下進行DNA擴增,無需繁瑣的溫度循環(huán)。5.**快速PCR**:由于其高溫穩(wěn)定性,BstDNAPolymeraseI也可用于快速PCR反應(yīng),縮短了實驗時間。6.**高GC含量模板擴增**:BstDNAPolymeraseI對高GC含量模板的擴增效果較好,因此在一些難擴增的模板中表現(xiàn)出色。Myelin Basic Protein (MBP) (synthetic)
重組人KIR2DL3蛋白(Recombinant Human KIR2DL3 Protein, His-Avi Tag)是一種重要的免疫調(diào)節(jié)受體,屬于殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(Killer-cell Immunoglobulin-like Receptor, KIR)家族,主要表達于自然殺傷細胞(NK細胞)和部分T細胞亞群表面。KIR2DL3通過識別并結(jié)合靶細胞表面特定的HLA-C分子,傳遞抑制性信號,從而抑制NK細胞的細胞毒活性,在維持免疫耐受、抗病毒免疫及腫瘤免疫監(jiān)視中發(fā)揮關(guān)鍵作用。該重組蛋白采用真核表達系統(tǒng)(如HEK293細胞)制備,確保了其天然構(gòu)象和生物活性。其N端融合了His標簽,便...