關(guān)于免疫組化，抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復合物是無色的，因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。南京英瀚斯生物科技有限公司有設計免疫組化的實驗哦！如果您對此有希望了解更多，可以與我們聯(lián)系！英瀚斯生物，專業(yè)病理染色切片平臺，免疫組化效果好！湖南免疫組化外包
細胞爬片免疫組化檢測實驗步驟
1、選擇貼壁良好的細胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。
4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。
5、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。
6、PBS洗3次，每次5min。
英瀚斯生物，細胞、動物、臨床樣本免疫組化檢測都可完成！
7、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。
8、PBS洗3次，每次5min。
9、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。
10、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。
11、切片經(jīng)過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 湖南免疫組化外包做好免疫組化，你需要了解這些！
免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？
（1）縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。
（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色；
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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果；
（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等；
（6）適當增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要；
（7）防止標本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強非特異性著色。
免疫組化實驗注意事項總結(jié)：
?本實驗室所用切片一般是石蠟切片。
?烘片：使蠟片水分蒸發(fā)，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差異。
?抗原修復時，使片子始終浸沒在修復液中，液體不能干。
?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱，濕盒放置1h，省時間和結(jié)合效果好，不要超過1h，容易過染。
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?二抗使用：兩個二抗放大信號或一個二抗；若抗體信號強，可不用放大信號，盡量增大信噪比。
?10XDAB在常溫溶解，盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，放于4度儲存時間久了效果不佳。
?復水和脫水時所用的梯度酒精不可混用，要區(qū)分開。
?加抗體和顯色液時，都要將片子甩干，在半干半濕的狀態(tài)下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋。
?整個操作過程中在顯色之前，一定不能干片。 病理免疫組化多少錢？
免疫組化應該選擇石蠟切片還是冰凍切片？
（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是***我向一老師請教得出的結(jié)論。因為作石蠟切片時要高溫烤片，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。
（2）冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細胞結(jié)構(gòu)，可能會使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫著兩者都可，那就都能做。
（3）石蠟切片的優(yōu)點可以保持組織細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片，為了防止RNA降解，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
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免疫組化（IHC）利用抗體檢測組織切片中蛋白質(zhì)和其他抗原的定位。
英瀚斯生物實驗外包，自有專業(yè)病理實驗室，可高效完成免疫組化檢測。
抗體-抗原的相互作用通過有色酶底物顯色檢測或熒光染料熒光檢測進行觀察。雖然IHC在定量方面不如蛋白質(zhì)印跡或ELISA，但是IHC可以提供完整組織中蛋白定位的寶貴信息。蛋白表達譜對病理學家以及作為診斷工具都具有重要意義。
IHC實驗成功的關(guān)鍵在于穩(wěn)定、優(yōu)化且可重復的染色方案，而該方案應使用高質(zhì)量的特異性試劑。 湖南免疫組化外包
