病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說(shuō)的一句話應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”;不管是臨床醫(yī)師,還是患者,他們問(wèn)的多的問(wèn)題則是“為什么要做免疫組化?”病理醫(yī)師通過(guò)“特殊染色”來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的識(shí)別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同,通過(guò)染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過(guò),由于組織固定或儲(chǔ)存等,會(huì)造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展,根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),則有了現(xiàn)在免疫組化的方法:不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異,抗體與被測(cè)組織中的特定抗原結(jié)合,進(jìn)而通過(guò)一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來(lái)。如有相應(yīng)顯色,則證實(shí)可能有被測(cè)抗原;無(wú)顯色則可能無(wú)被測(cè)抗原。當(dāng)然,這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色,則容易造成“假陽(yáng)性”;或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等,則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加,這些問(wèn)題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免,前者如各種顯色方法的優(yōu)化;后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開發(fā)及選擇。英瀚斯生物自有專業(yè)病理染色實(shí)驗(yàn)室,可做免疫組化。黑龍江什么是免疫組化要多少錢

免疫組化臨床應(yīng)用對(duì)“未分化”cancer的分類。未分化cancer包括cancer或肉瘤,在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer細(xì)胞的起源特征不能分類,初步區(qū)分組織學(xué)類型用非特異性抗體,在其基礎(chǔ)上再選用特異性抗體做進(jìn)一步鑒定。如分化差的cancer可顯示Vimentin或S-100蛋白,有時(shí)淋巴瘤可以表達(dá)上皮膜抗原,一些黑色素瘤表現(xiàn)出角蛋白,這同時(shí)也強(qiáng)調(diào)了在cancer診斷中應(yīng)使用一組抗體而不是單個(gè)抗體。如果您有實(shí)驗(yàn)外包的需求,可以與我們南京英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系,我們也有做免疫組化的服務(wù)!細(xì)胞免疫組化實(shí)驗(yàn)常見的免疫組化方法有哪些?

免疫組化有哪幾種分類 ?
1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。
英瀚斯生物病理染色效果好,效率高。
3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶(***)法;親和連接,如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。
免疫組化的結(jié)果分析:
免疫組化實(shí)驗(yàn)通常需要設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照(或替代對(duì)照)(陽(yáng)性對(duì)照是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無(wú)問(wèn)題;陰性對(duì)照與替代對(duì)照是排除有無(wú)非特異性染色)。一般情況下,陽(yáng)性對(duì)照顏色的特點(diǎn)為:Ag定位,包漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。且染色的強(qiáng)度不同(顏色深淺不一);陰性對(duì)照的特點(diǎn)為:染色細(xì)胞與組織無(wú)區(qū)別,顏色具有彌散性,分布均勻。
英瀚斯生物可承接各類病理染色,包括免疫組化。
說(shuō)明:免疫組化實(shí)驗(yàn)可以對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析,但要實(shí)驗(yàn)得到的必須是高質(zhì)量的染色切片,要求背景染色淺且特異性染色較深,這樣分析的結(jié)果才會(huì)比較準(zhǔn)確。 免疫組化實(shí)驗(yàn)原理,操作步驟盡在英瀚斯實(shí)驗(yàn)外包。

實(shí)驗(yàn)失敗常見問(wèn)題分析有哪些:
為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性?
答:這種現(xiàn)象主要是由操作不當(dāng)導(dǎo)致,可能的原因有:1.染色操作不當(dāng),致使染色失??;2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性;3.緩沖液中有疊氮化鈉,抑制了酶的活性;4.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)?shù)?。建議逐一排查,找到原因后重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽(yáng)性,這是為什么?答:與上一個(gè)問(wèn)題類似,出現(xiàn)的原因也是試驗(yàn)操作存在問(wèn)題,可能的原因有:1.切片在染色過(guò)程中抗體過(guò)濃,或者干片了;使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng);3.抗體溫育的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等。
在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深,這是為什么?答:以下幾方面會(huì)導(dǎo)致切片的背景過(guò)深:1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血,造成抗體的非特異性反應(yīng);2.內(nèi)源性過(guò)氧化酶沒有完全阻斷,顯色過(guò)程中過(guò)氧化酶與酶底物反應(yīng),造成背景;3.底物呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底。 免疫組化檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)!浙江動(dòng)物組織免疫組化可以做什么
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目前幾種常用免疫組化方法簡(jiǎn)單介紹
1)免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。
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2)免疫酶標(biāo)方法免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來(lái)的技術(shù)?;驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過(guò)光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前**常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是:定位準(zhǔn)確,對(duì)比度好,染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新,其特異性和靈敏度都在不斷提高,使用也越來(lái)越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測(cè)系統(tǒng)等。
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