做免疫組化時如何選擇一抗？

1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

2、應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting，或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等；甚至標(biāo)明石蠟切片或冰凍切片。

3、種屬反應(yīng)性的選擇（speciesreactivity）。這一點(diǎn)很重要，表明這種抗體可能存在種屬差別，且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內(nèi)的抗原。

4、種屬來源，一般兔來源的多是多克隆抗體；而小鼠來源的多是單克隆抗體，但也有另外。根據(jù)此來源來選擇相應(yīng)的二抗。

5、生產(chǎn)廠家的選擇。

免疫組化流程是什么樣的？內(nèi)蒙古細(xì)胞免疫組化檢測

免疫組化在臨床應(yīng)用中，還能及時準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶。英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗外包服務(wù)，一站式醫(yī)學(xué)科研平臺。采用常規(guī)病理方法難以檢出的實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移稱為微小轉(zhuǎn)移灶。在常規(guī)組織切片中，辨別單個或幾個轉(zhuǎn)移性cancer細(xì)胞很難，淋巴結(jié)內(nèi)竇性組織細(xì)胞增生與某些cancer的早期轉(zhuǎn)移有時也不易區(qū)別，而采用免疫組化方法，有助于及時準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)微小(cancer)轉(zhuǎn)移灶。對乳腺cancer而言主要是腋窩淋巴結(jié)的檢測，淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者預(yù)后差，這對進(jìn)一步醫(yī)療和預(yù)后判斷十分有意義。吉林大鼠免疫組化注意事項動物、細(xì)胞的免疫組化、免疫熒光，就找英瀚斯生物！

免疫組化原理及實(shí)驗步驟——實(shí)驗外包。眾所周知，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫實(shí)驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（第1抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，形成抗原 - 一抗 - 二抗復(fù)合物，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。

病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個免疫組化吧”；不管是臨床醫(yī)師，還是患者，他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化？”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進(jìn)行細(xì)胞的識別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同，通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過，由于組織固定或儲存等，會造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失，因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展，根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì)，則有了現(xiàn)在免疫組化的方法：不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異，抗體與被測組織中的特定抗原結(jié)合，進(jìn)而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來。如有相應(yīng)顯色，則證實(shí)可能有被測抗原；無顯色則可能無被測抗原。當(dāng)然，這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”，如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色，則容易造成“假陽性”；或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等，則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗的增加，這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免，前者如各種顯色方法的優(yōu)化；后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開發(fā)及選擇。英瀚斯生物，可做免疫組化定量分析。

免疫組化的質(zhì)量控制免疫組化的質(zhì)量控制是確保實(shí)驗結(jié)果可靠性和重復(fù)性的關(guān)鍵步驟。質(zhì)量控制包括實(shí)驗前的抗體驗證、實(shí)驗中的陽性對照和陰性對照，以及實(shí)驗后的結(jié)果評估?？贵w驗證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗證抗體的特異性和靈敏度。陽性對照是使用已知表達(dá)目標(biāo)蛋白的組織或細(xì)胞，確保實(shí)驗系統(tǒng)的有效性。陰性對照是使用不表達(dá)目標(biāo)蛋白的組織或細(xì)胞，排除非特異性結(jié)合。結(jié)果評估是通過圖像分析軟件對顯色結(jié)果進(jìn)行定量評估，確保實(shí)驗結(jié)果的可靠性。英瀚斯生物，組織包埋、切片、染色、免疫組化拍照、報告分析，一站式搞定！吉林切片免疫組化

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免疫組化有哪幾種分類 ？

 1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。

 2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。

英瀚斯生物病理染色效果好，效率高。

3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（***）法；親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是比較常用的方法；聚合物鏈接，如即用型二步法，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測。 內(nèi)蒙古細(xì)胞免疫組化檢測