Paenibacillus odorifer

嗜碳芽孢桿菌（Bacillus carboniphilus）是芽孢桿菌屬里少見(jiàn)的“高碳”。菌體桿狀、革蘭氏陽(yáng)性，可形成橢圓芽孢，更適溫度 45–50 ℃，pH 7.0–8.5，可在高濃度可溶性淀粉、糖蜜或木質(zhì)纖維素水解液中快速生長(zhǎng)，因而得名“碳愛(ài)好者”。一、高效利用碳源菌株 ATCC 700101 攜帶多拷貝 α-淀粉酶、普魯蘭酶和木聚糖酶基因，48 h 內(nèi)可將 15 % 淀粉液化糖化至還原糖 180 g L?1，轉(zhuǎn)化率 > 90 %，為濃醪發(fā)酵提供廉價(jià)糖源；與酵母共培養(yǎng)，乙醇產(chǎn)量提 12 %，蒸餾能耗降 8 %。二、高滲耐受胞內(nèi)積累相容溶質(zhì)四氫嘧啶，使菌體在糖濃度 300 g L?1、滲透壓 1.8 MPa 下仍保持 80 % 活性；芽孢耐 80 ℃ 30 min，便于濃糖液滅菌后直投，縮短發(fā)酵周期 12 h。三、農(nóng)業(yè)應(yīng)用菌株 BC-20 產(chǎn) IAA 20 mg L?1 并溶磷 2.9 mg L?1，玉米盆栽根長(zhǎng)增 28 %，吸磷量提 22 %；與秸稈復(fù)配堆肥，堆溫 24 h 升至 65 ℃，纖維素降解率提高 30 %，堆肥周期縮短 7 d，殺滅病原菌和雜草種子效果明顯。四、工業(yè)酶潛力其耐熱耐堿普魯蘭酶更適 pH 9、65 ℃，已用于淀粉糖化“一步法”，節(jié)省中和酸 20 %；木聚糖酶在 pH 10、60 ℃仍保持 85 % 活性，用于紙漿漂白，氯用量減少 30 %，降低可吸附有機(jī)鹵化物（AOX）排放。同時(shí)釋放揮發(fā)性 2,3-丁二醇，啟動(dòng)植物 ISR 信號(hào)，使葉片過(guò)氧化物酶活性提高 1.8 倍，達(dá)到“未病先防”。Paenibacillus odorifer

解糖腸球菌（Enterococcus saccharolyticus）是一種革蘭陽(yáng)性、兼性厭氧的球菌，更早從英國(guó)稻草墊料中分離，模式菌株ATCC 43076被廣用于API及VITEK®系統(tǒng)的質(zhì)量控制。該菌因能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸，故得名“解糖”，在分類學(xué)上與糞腸球菌、屎腸球菌并列，卻極少攜帶典型毒力基因，安全性較高。近年研究發(fā)現(xiàn)，解糖腸球菌具有突出的益生潛力：它可在pH 2.5的胃酸和0.3%膽鹽中保持90%存活，并分泌乳酸、乙酸等短鏈脂肪酸，迅速降低腸道pH，抑制沙門氏菌、大腸桿菌等致病菌的定植。體外試驗(yàn)還顯示，該菌能黏附于Caco-2細(xì)胞單層，上調(diào)緊密連接蛋白ZO-1與Occludin的表達(dá)，增強(qiáng)腸屏障功能，減輕脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。在動(dòng)物應(yīng)用中，日糧添加10^7 CFU/g解糖腸球菌可顯著提高斷奶仔豬平均日增重8.7%，降低料重比6.3%，并減少腹瀉率一半；其代謝產(chǎn)物還能促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸菌等有益菌增殖，使結(jié)腸丁酸濃度升高30%，改善絨毛高度與隱窩深度比。此外，該菌對(duì)萬(wàn)古霉素敏感，不含vanA/vanB耐藥操縱子，降低了基因橫向轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。綜上，解糖腸球菌憑借耐酸耐膽鹽、產(chǎn)酸抑菌、增強(qiáng)屏障及促生長(zhǎng)等多重功能，被視為替代抗生物質(zhì)的潛力菌株，未來(lái)在嬰幼兒食品、畜禽養(yǎng)殖及微生態(tài)制劑領(lǐng)域具有廣闊前景。檸檬色短小桿菌瘤內(nèi)菌變膨體，固氮酶把空氣中占七成卻極穩(wěn)定的N?裂成NH?，日夜輸送給宿主，自己只留一口碳糖。

枯草芽孢桿菌斯氏亞種（Bacillus subtilis subsp. spizizenii）是“枯草家族”里的輕騎兵，菌體纖細(xì)，卻藏著一套“攻防兼?zhèn)洹钡奈⑸?toolkit。1930 年代被 Spizizen 從沙漠塵土中分離，因而得名。它更擅在 35–45 ℃、低濕度的熱旱邊際快速萌發(fā)，芽孢外壁含特殊吡啶二羧酸鈣層，可耐 90 ℃熱水 20 min、紫外 5000 μW·s/cm2 仍存活，為制劑長(zhǎng)途運(yùn)輸省下冷鏈成本。復(fù)蘇后，斯氏亞種先分泌高活性 surfactin、fengycin 與 bacillomycin D，三脂肽協(xié)同擊穿病原菌膜，對(duì)番茄青枯、辣椒疫霉、小麥紋枯的抑菌帶寬達(dá) 28–32 mm；同時(shí)釋放揮發(fā)性 2,3-丁二醇，啟動(dòng)植物 ISR 信號(hào)，使葉片過(guò)氧化物酶活性提高 1.8 倍，達(dá)到“未病先防”。田間試驗(yàn)中，每畝用 100 g 斯氏亞種可濕粉拌種，玉米出苗率提升 12%，后期紋枯病指降 46%，產(chǎn)量增 8.3%；若與滴灌同施，可使連作草莓根際尖孢鐮刀菌數(shù)量下降 70%，果實(shí)可溶性糖提高 1.2 度，貨架期延長(zhǎng) 3 天。更妙的是，它能合成耐堿 α-淀粉酶與β-葡聚糖酶，在 pH 9.5、溫度 50 ℃ 條件下仍保持 80% 酶活，用于青貯飼料可提前 2 天完成乳酸發(fā)酵，降低干物質(zhì)損耗 3%。目前，工廠采用糖蜜—豆粕深部好氧發(fā)酵，48 h 芽孢量可達(dá) 5×101? CFU/mL，噴霧干燥后存活率 > 95%，制成黑衣粉劑，保質(zhì)期 24 個(gè)月。

死谷芽孢桿菌，名字聽來(lái)荒涼，卻是沙漠表層更耐命的“綠洲工匠”。它更初在美國(guó)死谷鹽殼下被分離，能在55℃、鹽濃度15%的“鹵水”里悠然萌發(fā)，芽孢外壁含特殊酸性肽聚糖，像給細(xì)胞穿陶瓷甲，紫外線、干燥、氧化齊攻亦難破。農(nóng)業(yè)學(xué)家把它請(qǐng)進(jìn)西北鹽堿地，菌體復(fù)蘇后分泌環(huán)脂肽，既松解板結(jié)土粒，又搶占根際生態(tài)位，抑制鐮刀菌、絲核菌，使向日葵爛根率降四成；同時(shí)釋放胞外多糖，裹住鈉離子，降低植物鹽分脅迫，畝產(chǎn)油脂提高一成。更妙的是，它能將難溶磷酸鈣轉(zhuǎn)化為有效磷，相當(dāng)于自帶“微肥”?？蒲袌F(tuán)隊(duì)用玉米漿發(fā)酵，把芽孢制成黑色粉劑，滴灌進(jìn)新疆棉田，三年下來(lái)，土壤氯鹽下降15%，棉花出苗率升兩成，農(nóng)藥減施三成。如今，科學(xué)家正給它插入耐旱基因，希望讓戈壁也長(zhǎng)出稻浪。小小死谷芽孢桿菌，用微觀之軀喚醒沉睡的鹽堿，為人類奪回被鹽分侵占的耕地，讓荒涼名不副實(shí)，讓沃野重獲新生。這些酶可以分解麻類植物中的果膠、半纖維素和木質(zhì)素，從而將纖維從植物組織中分離出來(lái)。

MB培養(yǎng)基基礎(chǔ)（Marine Broth Base）是一種專為海洋細(xì)菌設(shè)計(jì)的富營(yíng)養(yǎng)液體培養(yǎng)基，由蛋白胨、酵母粉及多種無(wú)機(jī)鹽組成，pH 7.2–7.6，滲透壓與海水相當(dāng)。配方中氯化鈉濃度約2–3%，并補(bǔ)充鎂、鉀、鈣等海水中主要離子，可瞬時(shí)啟動(dòng)依賴高鹽環(huán)境的嗜鹽菌與耐鹽菌，縮短延滯期。實(shí)驗(yàn)室常規(guī)做法是將培養(yǎng)基干粉溶解于蒸餾水后，補(bǔ)加陳海水或人工海鹽，即可恢復(fù)接近自然海水的離子譜，使挑剔的海洋放線菌、弧菌、假單胞菌等迅速進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)，用于后續(xù)分離、保藏或活性物質(zhì)篩選。由于海洋微生物常產(chǎn)色素、抗生物質(zhì)及胞外多糖，MB培養(yǎng)基的高營(yíng)養(yǎng)特性可充分展現(xiàn)這些次級(jí)代謝潛能：弧菌在28℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)12小時(shí)，菌濃即可達(dá)10? CFU/mL，菌液呈乳白或淡粉；某些Planococcus則分泌墨藍(lán)色素，使整瓶培養(yǎng)液變?yōu)榈逅{(lán)，成為天然色素研究的理想起點(diǎn)。若需固體培養(yǎng)，只需補(bǔ)加1.5%瓊脂，即成MBA平板，可在表面涂布沉積物懸液，28℃培養(yǎng)2–3天，挑取形態(tài)各異的單菌落進(jìn)行16S rDNA鑒定，流程簡(jiǎn)潔高效。在質(zhì)量控制方面，MB培養(yǎng)基需用人工海水或陳海水配制，切忌直接使用自來(lái)水，以免鈣鎂離子不足或氯殘留抑制菌體；滅菌后若出現(xiàn)沉淀，多為鎂鹽析出，可50℃水浴復(fù)溶，不影響使用。

溫室示蹤顯示，一畝接種的春豌豆可少施18公斤尿素，籽粒蛋白卻增3.6%，相當(dāng)于多收兩袋奶粉。Paenibacillus odorifer

肉湯培養(yǎng)基（測(cè)磷細(xì)菌菌數(shù)）是一種把“富營(yíng)養(yǎng)”與“溶磷篩選”合二為一的液體計(jì)數(shù)培養(yǎng)基。它在傳統(tǒng)牛肉膏蛋白胨肉湯基礎(chǔ)上進(jìn)行精簡(jiǎn)：牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g提供碳氮和生長(zhǎng)因子；磷源改為0.2 g難溶性磷酸三鈣，經(jīng)球磨過(guò)300目，懸于蒸餾水中呈乳白混懸液；pH調(diào)至7.0±0.2，分裝試管后121℃滅菌15 min，冷卻振蕩重懸即可接種。由于無(wú)瓊脂，培養(yǎng)基既保持肉湯的高營(yíng)養(yǎng)促生優(yōu)勢(shì)，又以懸浮顆粒Ca?(PO?)?為“磷開關(guān)”，可同步完成溶磷功能驗(yàn)證和菌數(shù)測(cè)定，適用于土壤、根際或堆肥浸出液中溶磷菌群的快速評(píng)估。操作方法沿用比較大可能數(shù)（MPN）法：將樣品按10?1–10??梯度稀釋，各取1 mL加入含5 mL肉湯培養(yǎng)基的螺口管，每稀釋度3重復(fù)，28℃靜置培養(yǎng)48 h。溶磷菌生長(zhǎng)使Ca?(PO?)?顆粒被酸溶解，培養(yǎng)液由乳白→局部透明→全管澄清，并伴隨菌膜形成；非溶磷菌雖可增殖，但培養(yǎng)基保持混濁無(wú)透亮。以“出現(xiàn)澄清+菌膜”為陽(yáng)性管，查MPN表即可算出每克樣品的溶磷菌數(shù)，全程只需3天，比平板溶磷圈法縮短一半時(shí)間。質(zhì)量控制要點(diǎn)：滅菌后磷酸三鈣易沉降，使用前需渦旋混勻；若肉湯本身含磷（牛肉膏批次差異），可先用磷鉬藍(lán)法測(cè)可溶磷，超過(guò)5 mg L?1即棄用。Paenibacillus odorifer