乳酸鐵營(yíng)養(yǎng)瓊脂(Lactose Iron Nutrient Agar)是一種兼具選擇性、鑒別性與營(yíng)養(yǎng)性的復(fù)合培養(yǎng)基,常用于食品、水質(zhì)及臨床標(biāo)本中革蘭陰性腸道菌的快速分離與初步鑒定。其關(guān)鍵原理在于“雙指示”設(shè)計(jì):乳糖作為可發(fā)酵碳源,與鐵鹽共同構(gòu)成判別系統(tǒng)——能發(fā)酵乳糖的菌株產(chǎn)酸,使酚紅指示劑由紅變黃;若同時(shí)產(chǎn)氣,則可在培養(yǎng)基內(nèi)形成氣泡或裂縫。而鐵離子的加入,讓具備硫化氫(H?S)生成酶的細(xì)菌(如某些變形桿菌、沙門氏菌)將硫代硫酸鈉還原,與Fe2?結(jié)合生成黑色FeS沉淀,菌落中心呈現(xiàn)特征性黑心,實(shí)現(xiàn)“一眼辨菌”。配方上,乳酸鐵營(yíng)養(yǎng)瓊脂在營(yíng)養(yǎng)瓊脂基礎(chǔ)上添加1%乳糖、0.02%硫代硫酸鈉與0.02%檸檬酸鐵銨,pH調(diào)至7.4±0.2,既保證腸桿菌科的基本營(yíng)養(yǎng)需求,又通過高糖與鐵鹽抑制部分非目標(biāo)菌的過度生長(zhǎng)。傾注平板后呈淡紅色半透明,若室溫存放出現(xiàn)泛黃,說明培養(yǎng)基已酸化,需棄用。接種時(shí),多采用分區(qū)劃線,35℃培養(yǎng)18–24小時(shí)即可讀取結(jié)果:乳糖發(fā)酵陽(yáng)性菌(如大腸埃希菌)形成黃色、邊緣整齊的大菌落;乳糖陰性菌(如志賀菌)則保持紅色;若菌落中心發(fā)黑,則提示H?S陽(yáng)性,需進(jìn)一步做血清學(xué)或質(zhì)譜確認(rèn)。瘤內(nèi)菌變膨體,固氮酶把空氣中占七成卻極穩(wěn)定的N?裂成NH?,日夜輸送給宿主,自己只留一口碳糖。灰肉色鏈霉菌

赫氏埃希氏菌是深海熱液口的“化學(xué)魔術(shù)師”,能在攝氏百度、千倍大氣壓的暗夜里,把硫化氫當(dāng)早餐,把二氧化碳當(dāng)點(diǎn)心來款待。它用氫硫還氧酶把劇毒硫化氫拆成電子與質(zhì)子,驅(qū)動(dòng)ATP合酶高速旋轉(zhuǎn),合成能量,再借逆三羧酸循環(huán)把無機(jī)碳織成有機(jī)糖,無需陽(yáng)光,也能養(yǎng)活整片“黑煙囪”叢林??茖W(xué)家搭乘深潛器采集菌體,發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞膜含特殊醚鍵脂質(zhì),像給自身裹上耐高溫的陶瓷瓦,蛋白質(zhì)內(nèi)部也布滿離子鍵,仿佛微型鋼鐵骨架,才讓它在沸水中依舊柔韌。實(shí)驗(yàn)室里,研究團(tuán)隊(duì)把它的固碳基因簇移植到工業(yè)大腸桿菌,使后者能在廢氣流里自養(yǎng)生長(zhǎng),產(chǎn)出的聚羥基脂肪酸酯可制可降解塑料,為碳中和提供新思路。小小赫氏埃希氏菌,用肉眼看不見的臂膀,托住地球深部與未來的綠色循環(huán)。
無機(jī)磷細(xì)菌培養(yǎng)基(不含瓊脂)是專為“溶磷菌”篩選與活性測(cè)定設(shè)計(jì)的合成液體培養(yǎng)基。其配方精髓在于“難溶磷”:磷酸三鈣〔Ca?(PO?)?〕以懸浮顆粒形式存在,不提供任何磷;葡萄糖或甘露醇擔(dān)任碳源,硫酸銨為氮源,并輔以Mg2?、K?、微量元素及磷酸鹽緩沖液,pH穩(wěn)定在6.8–7.2。唯有能分泌有機(jī)酸、質(zhì)子或磷酸酶的細(xì)菌,方可將不溶性磷轉(zhuǎn)化為可溶PO?3?,供自身同化并釋放到液相中,使原本乳白的懸濁液逐漸澄清,上清有效磷濃度上升,實(shí)現(xiàn)“溶磷”可視化與可量化。實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)潔高效:250 mL三角瓶裝50 mL培養(yǎng)液,接入土壤或根際稀釋液,28℃、170 r/min振蕩培養(yǎng)5–7天;每24 h取樣離心,鉬銻抗比色法測(cè)定鉬藍(lán)吸光度,繪制“溶磷-時(shí)間”曲線。高效菌株72 h內(nèi)上清磷濃度可突破200 mg·L?1,pH降至4.5以下,溶磷率與酸度呈明顯負(fù)相關(guān)。若需高通量比較,可改用96深孔板,同步測(cè)定OD???與可溶性磷,計(jì)算單位生物量溶磷效率,快速鎖定優(yōu)良菌株。質(zhì)量控制要點(diǎn):滅菌后磷酸三鈣易沉降,使用前需渦旋或磁力攪拌重懸;背景可溶磷須低于0.5 mg·L?1,避免假陽(yáng)性。儲(chǔ)存過程若出現(xiàn)絮凝,多為鈣-蛋白復(fù)合物,可超聲打散,不影響活性。晝夜輸送給花生,畝產(chǎn)蛋白因此提升三成,農(nóng)戶少施20公斤尿素,卻多收一筐飽滿果仁。

深褐芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus)是芽孢桿菌屬的“暗色特種兵”。菌落呈棕褐至近黑色、表面光滑有蠟光,革蘭氏陽(yáng)性,桿狀細(xì)胞可形成橢圓芽孢,耐干燥、耐紫外、耐堿,更適30–37 ℃,pH 6–9,廣分布于土壤、海洋沉積物和植物根際。一、生物防治菌株分泌atrophaein脂肽與幾丁質(zhì)酶,對(duì)番茄青枯、辣椒疫霉、小麥紋枯抑菌帶寬達(dá)26 mm;溫室試驗(yàn)畝施200 g菌粉,黃瓜枯萎病指下降45 %,農(nóng)藥用量減少三分之一。二、促生抗逆深褐芽孢桿菌產(chǎn)IAA 20 mg·L?1,溶磷3.2 mg·L?1,并產(chǎn)揮發(fā)性2,3-丁二醇,誘導(dǎo)玉米側(cè)根增30 %,吸鉀量提22 %;干旱脅迫下,小麥葉片相對(duì)含水量提高8 %,產(chǎn)量增10 %。三、工業(yè)酶寶庫(kù)其耐堿蛋白酶在pH 10、50 ℃仍保持85 %活性,已用于無磷洗滌劑,血漬去污力提升30 %;耐熱淀粉酶90 ℃半衰期2 h,為紡織退漿省去中和環(huán)節(jié),節(jié)能15 %。四、抗輻射模型因芽孢含高比例吡啶二羧酸鈣,對(duì)紫外、γ射線具有極強(qiáng)抵抗力,被ESA選為“火星模擬滅菌”指示菌,用于檢測(cè)航天器表面消毒效果。未來,借助合成生物學(xué),把深褐芽孢桿菌的抑菌、產(chǎn)酶、抗輻射模塊植入枯草底盤,可構(gòu)建“一菌多用”細(xì)胞工廠,為綠色農(nóng)業(yè)、清潔洗滌和太空滅菌提供可持續(xù)的微生物鑰匙。沙福芽孢桿菌是土壤里的“休眠戰(zhàn)士”。環(huán)境宜人時(shí),它像普通桿菌分裂繁殖。干酪乳桿菌亞種 DG
其芽孢可抗紫外、耐干燥,貨架期長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月,為商品化奠定基礎(chǔ)。灰肉色鏈霉菌
堀越氏芽孢桿菌(Bacillus horikoshii)是20世紀(jì)90年代由日本科學(xué)家堀越等從堿性溫泉沉積物中分離出的嗜堿菌,也是國(guó)際公認(rèn)的模式菌株(ATCC 700161)[ ^82^ ][ ^84^ ]。菌體桿狀、革蘭氏陽(yáng)性,可形成橢圓芽孢,更適pH 8.5–9.5、溫度30–37 ℃,在Na?CO?濃度50 g L?1的極端環(huán)境中仍能正常代謝,被稱為“天然堿性細(xì)胞工廠”。一、耐堿機(jī)制基因組編碼多拷貝Na?/H?逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(mnh、nhaC)和碳酸酐酶,可將胞內(nèi)多余Na?排出,并將CO?2?轉(zhuǎn)化為HCO??,維持胞內(nèi)pH穩(wěn)態(tài);細(xì)胞壁肽聚糖含高比例二氨基庚二酸,增強(qiáng)膜穩(wěn)定性,為高溫高堿酶的高效表達(dá)提供平臺(tái)。二、工業(yè)酶潛力其耐堿淀粉酶、普魯蘭酶更適pH 9–10,90 ℃半衰期>2 h,已用于淀粉糖化“一步法”,可省略傳統(tǒng)工藝中的中和環(huán)節(jié),節(jié)能15 %;耐堿蛋白酶在洗滌劑中可去除血漬、奶漬,低溫活性優(yōu)于市場(chǎng)同類酶20 %。三、農(nóng)業(yè)與環(huán)境應(yīng)用菌株P(guān)1具備“溶磷-鈍化重金屬”雙重功能:在pH 9、Cd2? 50 mg kg?1條件下,仍可將難溶磷酸鈣轉(zhuǎn)化為磷277 mg kg?1,同時(shí)胞外多糖吸附Cd2?,使水稻籽粒鎘含量下降35 %,產(chǎn)量提高18 %。