Lambda核酸外切酶的活性表現(xiàn)在其高度特異性和過程性地消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。以下是一些關鍵點,描述了Lambda核酸外切酶的活性特征:1.**高度過程性(HighlyProcessive)**:Lambda核酸外切酶是一種高度過程性的5'→3'外切酶,這意味著它能夠連續(xù)消化多個核苷酸,而不需要在每一步之后重新結合底物。2.**底物特異性(SubstrateSpecificity)**:該酶選擇性地消化5'端磷酸化的雙鏈DNA鏈,對單鏈DNA和非磷酸化DNA表現(xiàn)出低活性。3.**活性定義(ActivityDefinition)**:一個活性單位定義為在37°C下,30分鐘內在50μl反應體積中,使用1XLambdaExonucleaseReactionBuffer和1μg聲波破碎的雙鏈[3H]-DNA底物,產生10nmol酸溶性脫氧核苷酸所需的酶量。4.**反應條件(ReactionConditions)**:通常在37°C下進行孵育,使用1XLambdaExonucleaseReactionBuffer,該緩沖液包含67mMGlycine-KOH,2.5mMMgCl2,50μg/mlBSA,pH值為9.4。5.**熱失活(HeatInactivation)**:通過在75°C下加熱10分鐘可以使Lambda核酸外切酶失活。6.**特定活性(SpecificActivity)**:Lambda核酸外切酶的特定活性為50,000單位/毫克蛋白。

BloodDirectPCRMasterMix(2×)是一種專為從全血樣本直接進行PCR擴增而設計的即用型2倍濃度的預混合溶液。這種產品允許研究人員在不需要預先進行DNA提取或樣品處理的情況下,直接使用抗凝血樣品或干血斑樣品進行基因組DNA中目的基因的擴增。它通常包含以下特點:1.**耐血液樣本中的抑制劑**:含有的DNA聚合酶能夠抵抗血液樣本中的PCR抑制劑,如EDTA、肝素或檸檬酸鈉等。2.**高效率**:特別改造的DNA聚合酶具有高效率,能夠快速擴增目標DNA。3.**簡便性**:簡化了PCR實驗的步驟,因為不需要進行DNA的提取和純化。4.**直接電泳**:PCR產物可直接上樣進行電泳分析,無需添加額外的上樣緩沖液。5.**兼容性**:兼容多種抗凝劑,并且可以與多種常見PCR儀器配合使用。6.**優(yōu)化的配方**:包含優(yōu)化的緩沖體系、dNTPs、Mg2+等,適合血液樣本的PCR擴增。例如,Easy-Load?BloodDirectPCRMasterMix(2X)就是這類產品中的一個,它含有耐血的HemoTaq?DNA聚合酶,適用于EDTA、肝素或檸檬酸鈉抗凝血樣品或干血斑樣品直接PCR檢測。此外,

BloodDirectPCRMasterMix(2×)適合血液樣本的PCR擴增主要通過以下幾個方面:1.**抗血液抑制劑能力**:該預混合溶液含有的DNA聚合酶和其他成分能夠抵抗血液樣本中的PCR抑制劑,如膽酸鹽、血紅素、蛋白質等。2.**優(yōu)化的緩沖體系**:預混合溶液中的緩沖體系經過特別優(yōu)化,以適應血液樣本中的特定條件,包括pH、離子強度和Mg2+濃度,從而提高PCR擴增的效率和特異性。3.**高保真DNA聚合酶**:包含的DNA聚合酶具有高保真度,能夠在復制DNA時減少錯誤,保證擴增結果的準確性。4.**快速擴增速度**:一些BloodDirectPCRMasterMix產品具有快速擴增的特點,可以縮短PCR實驗的時間。5.**寬泛的GC含量適應性**:該產品可以用于擴增不同GC含量的基因,包括高GC和低GC區(qū)域,提高了PCR的適用性。6.**直接使用血液樣本**:無需對血液樣本進行DNA提取或純化,可以直接將抗凝血樣品或干血斑樣品加入PCR反應中。7.**兼容性**:兼容多種抗凝劑,如EDTA、肝素或檸檬酸鈉,適用于不同來源的血液樣本。8.**簡化的操作流程**:由于省去了DNA提取的步驟,BloodDirectPCRMasterMix簡化了實驗操作流程,減少了實驗時間和潛在的污染風險。
合成互補DNA(cDNA)的試劑盒是一種實驗室工具,用于從RNA模板通過逆轉錄過程合成DNA。逆轉錄是一種酶促反應,其中RNA模板被逆轉錄酶(一種特殊的DNA聚合酶)讀取,并根據(jù)RNA序列合成一條互補的DNA鏈。這個過程在分子生物學研究中非常重要,因為它允許科學家從RNA樣品中獲取遺傳信息,并進行進一步的分析和應用。cDNA合成試劑盒通常包含以下關鍵組分:1.**逆轉錄酶**:一種特殊的酶,能夠以RNA為模板合成DNA鏈。例如,M-MuLV反轉錄酶是一種常用的逆轉錄酶。2.**RNase抑制劑**:一種蛋白質,可以防止RNA樣品在實驗過程中被環(huán)境中的RNase酶降解。3.**緩沖液**:提供適宜的化學環(huán)境,保證逆轉錄酶的活性和反應的順利進行。4.**dNTPs**:四種去氧核苷酸三磷酸(dATP、dCTP、dGTP和dTTP),是合成DNA鏈的原料。5.**引物**:短的單鏈DNA或RNA基礎片段,用于啟動cDNA的合成。常見的引物類型包括oligo(dT)引物(針對mRNA的poly(A)尾)、隨機引物或特異性引物。6.**水**:通常是無核酸酶的水,以避免樣品被污染。SpCas9-NLS的應用范圍廣泛,可用于細胞內的CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導的基因編輯。

1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中的逆轉錄酶(ReverseTranscriptase,RT)具有一個關鍵特性:它們通過特定的突變消除了RNaseH活性。RNaseH是一種通常與某些逆轉錄酶相關的酶活性,它能夠降解RNA。然而,在1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中,逆轉錄酶被設計成不具有這種降解RNA的能力,從而在合成cDNA的鏈時保護RNA模板不被降解。以下是1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中逆轉錄過程的一般步驟,以及如何避免RNA降解:1.**RNA模板準備**:首先確保RNA模板的純度和完整性,避免DNA污染。可以通過DNaseI處理去除RNA樣品中的DNA污染。2.**混合反應組分**:將RNA模板、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)、逆轉錄引物(如oligo(dT)或隨機引物)和緩沖液混合。3.**逆轉錄酶添加**:加入經過突變處理的逆轉錄酶,這種酶缺乏RNaseH活性,因此不會在合成過程中降解RNA。4.**逆轉錄反應**:在適宜的溫度下進行逆轉錄反應,逆轉錄酶根據(jù)RNA模板合成cDNA鏈。5.**終止反應**:通過加熱至一定溫度來終止逆轉錄反應。利用His標簽通過親和層析從細胞裂解物中純化目標蛋白,然后可能通過離子交換層析、等方法進一步提純。Recombinant Mouse PGLYRP1 Protein,hFc Tag
在gRNA的引導下,Cas9 NLS可以對特定DNA序列進行剪切,適用于研究基因功能或進行基因編輯 。T4 DNA連接酶
在5'DNA腺苷酰化試劑盒中,"5'"表示DNA分子的5'端,即DNA鏈的起始端。DNA和RNA分子由核苷酸單元組成,每個核苷酸由一個糖分子、一個磷酸基團和一個含氮堿基組成。在DNA中,糖分子是脫氧核糖。這些核苷酸通過磷酸二酯鍵連接在一起形成多核苷酸鏈。DNA鏈有兩個端點,分別是5'端和3'端,這兩個端點是根據(jù)糖分子上碳原子的編號來命名的:-**5'端**(5'-phosphategroup):這個端點的磷酸基團連接在脫氧核糖的第五個碳原子上。-**3'端**(3'-hydroxylgroup):這個端點的脫氧核糖上第三碳原子上有一個自由的羥基(-OH)。5'DNA腺苷酰化試劑盒的目的是將腺苷酸(AMP)加到DNA分子的5'端,形成5'-磷酸腺苷鍵。這種修飾對于某些分子生物學應用非常重要,例如在RNA干擾(RNAi)、高通量測序、連接反應或PCR檢測中制備特定的接頭或適配體。在5'DNA腺苷?;噭┖兄?,通常包含一種酶(如腺苷酸化酶或某些RNA連接酶),它可以催化將ATP中的AMP部分轉移到DNA的5'端磷酸基團上,從而完成腺苷?;^程。T4 DNA連接酶
重組人SR-BI蛋白是一種在哺乳動物細胞中表達的重組蛋白,融合了hFc標簽,便于純化和檢測。SR-BI(Scavenger Receptor Class B Type I)是一種清道夫受體,主要參與膽固醇的逆向轉運和高密度脂蛋白(HDL)的代謝,在維持膽固醇穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。SR-BI在心血管疾病、病和脂質代謝紊亂的研究中具有重要的應用價值。SR-BI的功能與機制SR-BI是膽固醇逆向轉運的關鍵受體,通過選擇性攝取HDL中的膽固醇,將其轉運至肝臟和類固醇生成組織,進而促進膽固醇的排泄和膽汁酸的合成。這一過程對于維持膽固醇穩(wěn)態(tài)至關重要。此外,SR-BI還參與調節(jié)脂質代謝、炎癥反應和細胞凋亡,其...
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