在PCR產(chǎn)物的克隆中，Lambda核酸外切酶（λExonuclease）有其特定的應用和優(yōu)勢，但它不能完全替代其他酶。以下是一些替代酶和它們的特點：1.**ExonucleaseIII（ExoIII）**：-ExoIII具有3'→5'外切脫氧核糖核酸酶活性，尤其適合雙鏈DNA的平末端、5'-突出末端或切口，從DNA鏈的3'-端釋放5'-單磷酸核苷酸，產(chǎn)生單鏈DNA片段。-與Lambda核酸外切酶相比，ExoIII對具有3'-突出末端的DNA有活性，而Lambda核酸外切酶則對5'-磷酸化的雙鏈DNA有更高的活性。2.**TaqDNA聚合酶**：-在平端克隆中，可以使用TaqDNA聚合酶和dATP進行“3'dA加尾”，以提高連接效率。-這種方法通過在PCR產(chǎn)物的3'端添加突出的腺嘌呤（dA），增加了與載體連接的可能性，從而提高克隆效率。3.**TOPO克隆載體**：-TOPO克隆載體含有共價連接的DNA拓撲異構酶I，可同時作為限制性內(nèi)切酶和連接酶。-與傳統(tǒng)PCR克隆載體相比，TOPO克隆載體具有更短的連接反應時間、更高的克隆效率以及更簡單的分子克隆實驗方案。綜上所述，雖然Lambda核酸外切酶在特定情況下非常有用，但它不能完全替代其他酶。每種酶都有其獨特的特性和應用場景，選擇合適的酶取決于具體的克隆需求和實驗設計。Pfu DNA Polymerase的長片段擴增能力：Pfu DNA Polymerase能夠高效擴增長片段DNA，適合復雜基因組研究。DNA Marker VI

在PCR實驗中，確保引物與目標序列的完全特異性是至關重要的，這可以通過以下幾個步驟實現(xiàn)：1.**基于已知序列設計引物**：根據(jù)目標DNA序列，使用計算機軟件（如Primer3、Snapgene等）設計出兩個互補的引物，以保證引物的特異性和準確性。2.**引物長度和Tm值**：通常選擇引物長度為18-25個核苷酸，引物的Tm值（熔解溫度）通常選擇在50-60℃之間，以保證引物和目標DNA序列的穩(wěn)定性。3.**避免與其他DNA序列的交叉反應**：使用BLAST等計算機軟件進行引物特異性檢查，確保引物只與目標序列互補，而不與其他非目標序列發(fā)生雜交。4.**避免引物自身結合**：設計引物時要避免引物之間自身結合，因為這會影響PCR反應的特異性和效率。5.**引物的3'端設計**：引物的3'端應避免富含GC，以確保與模板序列的穩(wěn)定結合。同時，避免3'端存在序列，以防止形成引物二聚體。6.**避免內(nèi)部二級結構**：設計引物時，應避免存在可能產(chǎn)生內(nèi)部二級結構的序列，以保證引物與模板序列的結合。7.**使用在線工具進行引物特異性檢驗**：利用Primer-BLAST等在線工具設計引物，并進行特異性驗證，確保引物只擴增特定目標序列。Recombinant Cynomolgus CD27 Ligand/CD70 Protein,His Tag與Taq DNA Polymerase不同，Pfu DNA Polymerase產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端，無3'端"A"突出。

BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一種來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillussubtilis）的DNA聚合酶。這種酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性，但缺失了5'-3'核酸外切酶結構域，因此它具有鏈置換活性，可以用于重組酶聚合酶擴增（RPA）等恒溫擴增技術。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些關鍵特性和應用：1.**活性定義**：在37°C條件下，30分鐘內(nèi)將10nmol的dNTP摻入酸不溶性物質(zhì)所需的酶量定義為1個活性單位（U）。2.**熱失活條件**：75°C，20分鐘。3.**酶保存液成分**：25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**儲存條件**：-25~-15°C保存，有效期2年。5.**注意事項**：-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性，BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配對的突出末端，因而不適用于生成平齊末端。-25°C時BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性，是同溫度下Klenow片段(3'-5'exo-)的兩倍。6.**應用**：-隨機引物法標記。-cDNA第二條鏈的合成。-單個dA的加尾。-鏈置換的DNA合成。

Cre重組酶在基因編輯中的操作主要涉及以下幾個步驟：1.**識別與結合**：-Cre重組酶首先識別并分別結合兩個LoxP序列的兩個反向重復序列，形成一個二聚體。2.**四聚體形成**：-兩個二聚體互相靠近，形成由四個Cre分子與兩個LoxP位點結合形成的四聚體復合物。3.**DNA切割與交換**：-Cre重組酶在每個LoxP位點的間隔序列中引導單鏈切割，產(chǎn)生帶有3’端羥基的斷裂。每個LoxP位點的兩個單鏈分別被切割。切割產(chǎn)生的自由3’端與對側的3’端進行交換和重連，形成Holliday交叉結構。4.**分子重組與解旋**：-Holliday交叉結構通過Cre酶的作用被解旋并重組，形成新的重組產(chǎn)物。這個過程導致兩個LoxP位點之間的DNA序列被刪除、反轉或易位，具體效果取決于LoxP序列的排列方式（方向和位置）。5.**條件性基因編輯**：-通過建立特異性Cre小鼠，該小鼠中的Cre重組酶由特定啟動子驅動，可在特定細胞或組織或全身表達Cre重組酶。與帶有Lox位點的Flox小鼠雜交，子代中可以獲得既帶有Cre又帶有Flox基因的小鼠，實現(xiàn)條件性基因打靶（表達或敲除靶基因）。UBE2L3在調(diào)節(jié)NF-κB信號通路中的作用可能對免疫反應和炎癥過程至關重要。

Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌（Thermophilic Geobacillus sp）DNA聚合酶I衍生的酶，缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關鍵信息：來源和特性：Bst Plus DNA Polymerase 具有更強的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性，適合用于抗污染的等溫擴增反應，如LAMP和CPA等。應用：主要應用于等溫DNA擴增，包括環(huán)介導等溫擴增（LAMP）和其他等溫擴增技術。規(guī)格：活性定義：1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分：包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油，pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式：提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)，貨號14402ES，以及凍干粉形式的產(chǎn)品，貨號14405ES，不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性：Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度，低至5copies目的基因可測，且在飛克（fg）級別的模板量下也能快速達到閾值。在37°C下，該酶可以保持相對穩(wěn)定的效應長達5天，并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲存條件：建議在-25℃至-15℃下儲存，以保持產(chǎn)品活性，并避免反復凍融。牛痘DNA拓撲異構酶I具有解超螺旋的活性，可以解開雙鏈閉合環(huán)狀DNA的超螺旋結構，便于后續(xù)的酶切反應。DNA Marker VI

將Cas9/sgRNA復合物轉染到目標細胞中?？梢允褂弥|(zhì)體介導轉染、電穿孔或其他轉染技術 。DNA Marker VI

耐高鹽全能核酸酶（SaltActiveUltraNuclease）是一種重組非特異性核酸內(nèi)切酶，具有以下特點和應用：1.**來源與表達**：耐高鹽全能核酸酶來源于海洋微生物，通過基因工程改造在大腸桿菌（_Escherichiacoli_）中表達純化。2.**活性條件**：在0.5MNaCl條件下具有比較好活性，這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。3.**應用領域**：-**病毒純化、疫苗生產(chǎn)**：作為宿主殘留核酸去除試劑，將宿主殘留核酸降至皮克（pg）級別，提高生物制品功效和安全性。-**蛋白和多糖類制藥工業(yè)**：用于去除核酸污染，降低細胞上清和細胞裂解液的粘度，提高蛋白純化效率及功能研究。-**防止細胞結團**：有效防止細胞和疫苗研究中外周血單核細胞（PBMC）的結團。4.**產(chǎn)品性質(zhì)**：-分子量：24.7kDa。-等電點：9.61。-純度：≥99%。-酶活：250-300U/μL。-適溫度：37℃（工作范圍0-42℃）。-輔助因子：1-10mMMg2+。5.**儲存條件**：以無菌液體酶的形式提供，儲存于緩沖液（25mMTris-HCl，5mMMgCl2，500mMNaCl，50%Glycerol，pH7.5）中，無色透明液體。干冰運輸，-15℃~-25℃保存，有效期2年。DNA Marker VI