免疫組化原理及實(shí)驗(yàn)步驟——實(shí)驗(yàn)外包。眾所周知，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來(lái)，以其作為抗原或半抗原去免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，制備特異性抗體，再用這種抗體（第1抗體）作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過(guò)氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，形成抗原 - 一抗 - 二抗復(fù)合物，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無(wú)色的，因此，還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來(lái)。通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。免疫組化技術(shù)的原理、分類和優(yōu)點(diǎn)！浙江小鼠免疫組化怎么樣
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體
免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
免疫組化就找英瀚斯，高效率，高質(zhì)量。
免疫組化常用的染色方法
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用。 新疆大鼠免疫組化怎么選擇病理免疫組化多少錢？
英瀚斯生物為您整理免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟
1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水，用PBS沖洗三次，每次5min。
2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù)，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸。
3、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%過(guò)氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。
5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。
6、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過(guò)夜。
7、PBS洗3次，每次5min。
8、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min。
9、PBS洗3次，每次5min。
10、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。
11、顯色完全后，蒸餾水或自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來(lái)水沖洗，氨水返藍(lán)，流水沖洗。
12、切片經(jīng)過(guò)梯度酒精（70-100%）10min一個(gè)梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。
免疫組化的特點(diǎn)：
1）特異性強(qiáng)。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
2）敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。
3）定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合。該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義的。
英瀚斯生物，自建病理平臺(tái)實(shí)驗(yàn)室，專業(yè)免疫組化。 免疫組化怎么做？步驟方法？
關(guān)于免疫組化的封閉：用和二抗來(lái)源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封閉用血清，勿洗；注意：封閉時(shí)間根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來(lái)源一致的血清，切記是BSA，不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好？答：***是待檢樣本會(huì)非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致背景過(guò)高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點(diǎn)看，BSA和血清沒(méi)有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會(huì)有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無(wú)關(guān)，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無(wú)法封閉Fc受體。哪里可以做免疫組化？浙江小鼠免疫組化怎么樣
英瀚斯生物免疫組化，高效高質(zhì)量出結(jié)果。浙江小鼠免疫組化怎么樣
做免疫組化時(shí)如何選擇一抗？
1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等避免）。
2、應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting，或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等；甚至標(biāo)明石蠟切片或冰凍切片。
3、種屬反應(yīng)性的選擇（speciesreactivity）。這一點(diǎn)很重要，表明這種抗體可能存在種屬差別，且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。
4、種屬來(lái)源，一般兔來(lái)源的多是多克隆抗體；而小鼠來(lái)源的多是單克隆抗體，但也有另外。根據(jù)此來(lái)源來(lái)選擇相應(yīng)的二抗。
5、生產(chǎn)廠家的選擇。
浙江小鼠免疫組化怎么樣
