細胞壁缺陷型細菌培養(yǎng)基(L-型細菌培養(yǎng)基)是一種為支持細胞壁缺失或缺陷型細菌(如L-型細菌)生長而設(shè)計的高滲、低毒、富營養(yǎng)的培養(yǎng)基。這類細菌因缺乏完整的細胞壁,不能耐受常規(guī)培養(yǎng)基的滲透壓,因此必須在培養(yǎng)基中加入高濃度的滲透穩(wěn)定劑,如蔗糖(10–15%)、NaCl(2–5%)或甘露醇,以維持細胞膜的穩(wěn)定性,防止細胞破裂。L-型細菌通常由某些抗生物質(zhì)(如青霉素、頭孢類)誘導產(chǎn)生,也可在某些慢性沾染或免疫抑制狀態(tài)下自然出現(xiàn)。由于其生長緩慢、形態(tài)多變、常規(guī)培養(yǎng)難以檢出,因此需要的培養(yǎng)基進行分離與培養(yǎng)。細胞壁缺陷型細菌培養(yǎng)基通常以腦心浸液(BHI)或蛋白胨酵母膏為基礎(chǔ),提供豐富的氨基酸、維生素和其他生長因子,促進L-型細菌的復蘇與增殖。部分配方還會加入馬血清或人血清(5–10%),以提供膽固醇和脂質(zhì),進一步增強膜的穩(wěn)定性。該培養(yǎng)基可用于臨床標本(如尿液、血液、關(guān)節(jié)液)中L-型細菌的分離,尤其適用于慢性、反復沾染但常規(guī)培養(yǎng)陰性的病例。接種后通常在35–37℃、5% CO?條件下培養(yǎng)3–7天,L-型細菌可形成“油煎蛋”樣菌落,即致密、邊緣擴散的微小菌落,需用倒置顯微鏡觀察確認。③分泌蛋白酶與脂肽,抑制番茄青枯、辣椒疫霉,病指下降四成。乳酪短桿菌
特基拉芽孢桿菌(Bacillus tequilensis)是芽孢桿菌屬中一顆快速升起的新星。更早在墨西哥酒窖的橡木桶中被發(fā)現(xiàn),它可在60℃、8%乙醇或含砷10g/L的廢水中保持活性,芽孢能休眠十年不死,被視作“極端環(huán)境基因庫”。其抗逆機制由“吸附-代謝-固定”三級網(wǎng)絡(luò)組成:ArsR-arsB-arsC操縱子把As3?氧化為低毒As??并泵出胞外;組氨酸富集蛋白Teq可吸附Au3?、Cd2?,吸附量達50mg/g,使湖南砷污染稻田兩年可溶砷下降45%,稻米增產(chǎn)15%,籽粒砷低于國標一半。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域,特基拉芽孢桿菌表現(xiàn)出廣譜抑菌與促生雙重功效。菌株M408F10-3F8對12種病原菌和卵菌有強拮抗作用,黃瓜枯萎盆栽防效58%,與多菌靈相當,同時分泌IAA促生;菌株2-2a對大豆炭疽、黑斑、灰斑等葉部病害及根腐、立枯等土傳病害兼具防效,且定殖速度快;菌株20Q9B-2-14對馬鈴薯軟腐病菌抑制明顯,為生防制劑添新選項。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中,菌株ZSGD5與Bt-CO通過“異養(yǎng)硝化-好氧反硝化”低耗氧途徑,把氨氮、亞硝酸鹽迅速轉(zhuǎn)為氮氣逸出,5℃仍保持活性,可使斑節(jié)蝦、花白鰱池塘氨氮下降60%,換水量減少三成。新洋蔥伯克霍爾德氏菌組蛋白樣蛋白緊緊包裹DNA,防止高溫斷裂;同時擁有一套高效熱休克蛋白(Hsp)系統(tǒng),可快速修復變性蛋白。

包姜氏液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)(BGA Broth Base)是為培養(yǎng)姜苗根莖共生促生菌而設(shè)計的富氮液體培養(yǎng)基,由包頭師范學院與姜科作物團隊共同優(yōu)化,故得“包姜”之名。其配方以酪蛋白胨與大豆木瓜酶消化物提供與緩釋氨基酸,酵母粉補充B族維生素和微量元素,可溶性淀粉作碳源,既避免葡萄糖過量產(chǎn)酸,又模擬根莖分泌物成分;特別添加0.3% K?HPO?與0.2% MgSO?,緩沖能力強,可中和菌體代謝酸,維持pH 6.8–7.0,滿足假單胞菌、芽孢桿菌及稀有放線菌的同步增殖。實際應用中,1 L培養(yǎng)基接種5 mL姜塊研磨液,28℃、160 r/min振蕩培養(yǎng)24 h,菌濃即可達2×10? CFU/mL,菌液呈淡棕、微粘,帶新鮮生姜清香;繼續(xù)補糖發(fā)酵可產(chǎn)胞外多糖1.2 g/L,對番茄、辣椒具明顯促根活性。若需固體分離,補加1.2%瓊脂即得BGA平板,可直觀觀察菌落形態(tài):有效菌株多呈乳白、邊緣波狀,48 h后在365 nm紫外下可見藍綠色熒光,與16S rDNA序列聯(lián)用,可在72 h內(nèi)完成“功能—種屬”雙重鑒定。質(zhì)量控制上,BGA培養(yǎng)基需用去離子水配制,高壓滅菌后若出現(xiàn)輕微沉淀,為鎂—磷復合物,50℃水浴搖勻即可;儲存過程若液體變黃,提示淀粉水解過度,應廢棄。
長賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus macroides)是2013年從鯉腸道中分離的新成員,因細胞呈長桿、鏈狀排列而得名。它能在1/2LB培養(yǎng)基上形成淺褐色、光滑、直徑約1mm的菌落,革蘭氏陽性,具周生鞭毛,可產(chǎn)卵圓形芽孢,耐pH6–9、鹽0–6%,更適溫度35–37℃,對干旱、高溫和膽汁鹽均有良好適應力。其“本領(lǐng)”在于三酶合一:吲哚乙酸(IAA)分泌量達18mg/L,可刺激小麥根長增加35%;ACC脫氨酶活性降低植物乙烯水平,緩解鹽脅迫;鐵載體與蛋白酶協(xié)同,可抑制番茄青枯、辣椒疫霉等病原菌,抑菌帶寬22–28mm。山東大棚試驗顯示,用長賴氨酸芽孢桿菌菌液灌根,番茄根結(jié)線蟲侵染率下降42%,果實Vc含量提高12%,產(chǎn)量增8.3%。工業(yè)端,菌株ZJB-17009的酯酶對N-苯乙酰-DL-氨基酸水解選擇性達99%,已被用于綠色合成L-氨基酸;另一株C1在白酒窖池可產(chǎn)己酸和乙酸乙酯,使基酒主體香提高30%,為“增香菌”提供新選擇。未來,借助合成生物學,長賴氨酸芽孢桿菌有望被植入耐鹽、產(chǎn)聚-γ-谷氨酸模塊,成為鹽堿地“一菌多效”的先鋒,讓貧瘠土地也飄出豐收香。隨后,細菌釋放信號,誘導根部細胞分裂,三天鼓出乳白根瘤,像給根系掛上微型氮肥廠。

無機磷細菌培養(yǎng)基(Inorganic Phosphorus Bacteria Medium)是專門用于篩選、計數(shù)和驗證具有“溶磷”功能微生物的合成培養(yǎng)基。其關(guān)鍵思路是“以難溶磷為磷源”:配方中不添加任何有機磷或磷,而用磷酸三鈣〔Ca?(PO?)?〕、磷灰石或磷酸鋁等難溶性無機磷酸鹽作為磷源;同時提供葡萄糖、蔗糖或甘露醇等碳源,以及硫酸銨或硝酸鈉作氮源,并輔以鎂、鉀、硫、微量元素和緩沖系統(tǒng),pH 通常調(diào)至 6.8–7.2。只有能分泌有機酸、質(zhì)子、酶類(如葡萄糖酸、甲酸、磷酸酶、植酸酶)的溶磷菌,才能將不溶性磷轉(zhuǎn)化為可溶的 PO?3?,供自身利用并在培養(yǎng)基上生長。培養(yǎng)基滅菌后呈乳白渾濁,傾注平板后表面略帶沉淀。接種土壤稀釋液或根際樣品,28 ℃培養(yǎng) 3–5 天,具有溶磷能力的菌落周圍會出現(xiàn) 2–10 mm 的透明暈圈——這是菌落分泌的酸或酶溶解磷酸三鈣所致,暈圈直徑與溶磷能力呈正相關(guān)。若需定量,可挑取暈圈明顯的單菌落,接入液體無機磷培養(yǎng)基,振蕩培養(yǎng) 7 天,用鉬銻抗比色法測定上清液中有效磷含量,計算溶磷率(mg P·L?1)與菌體生物量的比值,即可比較不同菌株的溶磷效率。玉米側(cè)IAA提升68%,禿頂縮短27%,增產(chǎn)18.6%,相當于少施25 kg復合肥仍多打糧。金針菇
晝夜輸送給花生,畝產(chǎn)蛋白因此提升三成,農(nóng)戶少施20公斤尿素,卻多收一筐飽滿果仁。乳酪短桿菌
巴基斯坦賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus pakistanensis)是2009年從巴基斯坦干旱區(qū)大豆根際分離的新種,因肽聚糖含meso-二氨基庚二酸而非賴氨酸,在屬內(nèi)獨樹一幟。菌體革蘭氏陽性、具周生鞭毛,可形成橢圓芽孢,能在10–28℃、pH6.5–9.0及0–6%NaCl范圍內(nèi)生長,并耐受150mM硼酸,被視為“中度耐硼”的旱地先鋒。在抗逆機制上,該菌細胞膜以二磷脂酰甘油、磷酸乙醇胺為主,脂肪酸iso-C18:0占30%,賦予其高膜穩(wěn)定性;基因組G+C含量37%,攜帶多重外排泵與滲透調(diào)節(jié)基因,可在干旱、鹽堿環(huán)境中維持胞內(nèi)水平衡。功能層面,巴基斯坦賴氨酸芽孢桿菌表現(xiàn)出“促生-抗病-解”三合一特性。實驗室條件下,其IAA產(chǎn)量達118mg/L,明顯高于同屬菌株,可刺激小麥根長增加35%,干重提高28%;菌液處理后,花生根結(jié)線蟲侵染率下降42%,對南方根結(jié)線蟲卵孵化抑制率超60%,為線蟲綠色防控提供新選擇。此外,該菌對革蘭氏陰性植物病原菌具有明顯抑菌圈,代謝產(chǎn)物中的酶抑制劑可干擾細菌雙功能酶系統(tǒng),相關(guān)菌機制仍在持續(xù)解析。乳酪短桿菌