瓜類鞘氨醇單胞菌

乳酸鐵營(yíng)養(yǎng)瓊脂（Lactose Iron Nutrient Agar）是一種兼具選擇性、鑒別性與營(yíng)養(yǎng)性的復(fù)合培養(yǎng)基，常用于食品、水質(zhì)及臨床標(biāo)本中革蘭陰性腸道菌的快速分離與初步鑒定。其關(guān)鍵原理在于“雙指示”設(shè)計(jì)：乳糖作為可發(fā)酵碳源，與鐵鹽共同構(gòu)成判別系統(tǒng)——能發(fā)酵乳糖的菌株產(chǎn)酸，使酚紅指示劑由紅變黃；若同時(shí)產(chǎn)氣，則可在培養(yǎng)基內(nèi)形成氣泡或裂縫。而鐵離子的加入，讓具備硫化氫（H?S）生成酶的細(xì)菌（如某些變形桿菌、沙門氏菌）將硫代硫酸鈉還原，與Fe2?結(jié)合生成黑色FeS沉淀，菌落中心呈現(xiàn)特征性黑心，實(shí)現(xiàn)“一眼辨菌”。配方上，乳酸鐵營(yíng)養(yǎng)瓊脂在營(yíng)養(yǎng)瓊脂基礎(chǔ)上添加1%乳糖、0.02%硫代硫酸鈉與0.02%檸檬酸鐵銨，pH調(diào)至7.4±0.2，既保證腸桿菌科的基本營(yíng)養(yǎng)需求，又通過高糖與鐵鹽抑制部分非目標(biāo)菌的過度生長(zhǎng)。傾注平板后呈淡紅色半透明，若室溫存放出現(xiàn)泛黃，說明培養(yǎng)基已酸化，需棄用。接種時(shí)，多采用分區(qū)劃線，35℃培養(yǎng)18–24小時(shí)即可讀取結(jié)果：乳糖發(fā)酵陽性菌（如大腸埃希菌）形成黃色、邊緣整齊的大菌落；乳糖陰性菌（如志賀菌）則保持紅色；若菌落中心發(fā)黑，則提示H?S陽性，需進(jìn)一步做血清學(xué)或質(zhì)譜確認(rèn)。收獲后根瘤脫落，礦化釋氮，后茬玉米吸氮量提15%，土壤硝態(tài)淋失降四成，地下水不再喊“又咸又綠”。瓜類鞘氨醇單胞菌

肉湯培養(yǎng)基（測(cè)磷細(xì)菌菌數(shù)）是一種把“富營(yíng)養(yǎng)”與“溶磷篩選”合二為一的液體計(jì)數(shù)培養(yǎng)基。它在傳統(tǒng)牛肉膏蛋白胨肉湯基礎(chǔ)上進(jìn)行精簡(jiǎn)：牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g提供碳氮和生長(zhǎng)因子；磷源改為0.2 g難溶性磷酸三鈣，經(jīng)球磨過300目，懸于蒸餾水中呈乳白混懸液；pH調(diào)至7.0±0.2，分裝試管后121℃滅菌15 min，冷卻振蕩重懸即可接種。由于無瓊脂，培養(yǎng)基既保持肉湯的高營(yíng)養(yǎng)促生優(yōu)勢(shì)，又以懸浮顆粒Ca?(PO?)?為“磷開關(guān)”，可同步完成溶磷功能驗(yàn)證和菌數(shù)測(cè)定，適用于土壤、根際或堆肥浸出液中溶磷菌群的快速評(píng)估。操作方法沿用比較大可能數(shù)（MPN）法：將樣品按10?1–10??梯度稀釋，各取1 mL加入含5 mL肉湯培養(yǎng)基的螺口管，每稀釋度3重復(fù)，28℃靜置培養(yǎng)48 h。溶磷菌生長(zhǎng)使Ca?(PO?)?顆粒被酸溶解，培養(yǎng)液由乳白→局部透明→全管澄清，并伴隨菌膜形成；非溶磷菌雖可增殖，但培養(yǎng)基保持混濁無透亮。以“出現(xiàn)澄清+菌膜”為陽性管，查MPN表即可算出每克樣品的溶磷菌數(shù)，全程只需3天，比平板溶磷圈法縮短一半時(shí)間。質(zhì)量控制要點(diǎn)：滅菌后磷酸三鈣易沉降，使用前需渦旋混勻；若肉湯本身含磷（牛肉膏批次差異），可先用磷鉬藍(lán)法測(cè)可溶磷，超過5 mg L?1即棄用。艾蒿糖霉菌菌體還可吸附Au3?、Cd2?，吸附量分別達(dá)50mg/g與35mg/g，為礦區(qū)重金屬修復(fù)提供低成本方案。

黏瓊脂芽孢桿菌是2007年在深海沉積物里被“撈”出的新成員，因菌落能拉出長(zhǎng)長(zhǎng)瓊脂糖絲，得了“黏瓊脂”的綽號(hào)。它生活在低溫、高壓、寡營(yíng)養(yǎng)的海底，靠分泌特殊β-瓊脂糖酶，把堅(jiān)硬的海藻碎片分解成單糖，再經(jīng)乙酰-CoA途徑合成能量，既填飽自己，也為周圍菌群打開“糧倉(cāng)”，成為深海碳循環(huán)的隱形樞紐。實(shí)驗(yàn)室更看重的是它的“冷酶工廠”。其瓊脂糖酶更適溫度只25℃，在4℃仍保持60%活性，比陸源同類酶省電一半；若把粗酶液直接噴到石花菜漿里，40分鐘就能讓膠體黏度降80%，濾出的寡糖可作益生元、化妝品保濕劑，甚至用于微膠囊壁材。更妙的是，菌體在貧氮環(huán)境會(huì)自發(fā)形成厚壁芽孢，可耐55℃、紫外照射兩小時(shí)，噴霧干燥存活率仍超90%，給工業(yè)化降低了冷鏈與包被成本。國(guó)內(nèi)團(tuán)隊(duì)已把黏瓊脂芽孢桿菌制成灰粉末，用于即食涼粉、果凍的低溫脫膠，使生產(chǎn)周期從12小時(shí)縮到3小時(shí)，耗水減少四成；殘?jiān)缓烟牵勺黠暳咸砑觿?，提高仔豬日增重5%。未來，科學(xué)家計(jì)劃把耐冷酶基因轉(zhuǎn)進(jìn)枯草芽孢桿菌，讓“冷酶”在常溫海洋里就地降解漂浮海藻，為藍(lán)碳保護(hù)再添一把微生物鑰匙。小小黏瓊脂芽孢桿菌，用一縷黏絲，把千米深海的秘密縫進(jìn)人類綠色的產(chǎn)業(yè)鏈。

巴基斯坦賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus pakistanensis）是2009年從巴基斯坦干旱區(qū)大豆根際分離的新種，因肽聚糖含meso-二氨基庚二酸而非賴氨酸，在屬內(nèi)獨(dú)樹一幟。菌體革蘭氏陽性、具周生鞭毛，可形成橢圓芽孢，能在10–28℃、pH6.5–9.0及0–6%NaCl范圍內(nèi)生長(zhǎng)，并耐受150mM硼酸，被視為“中度耐硼”的旱地先鋒。在抗逆機(jī)制上，該菌細(xì)胞膜以二磷脂酰甘油、磷酸乙醇胺為主，脂肪酸iso-C18:0占30%，賦予其高膜穩(wěn)定性；基因組G+C含量37%，攜帶多重外排泵與滲透調(diào)節(jié)基因，可在干旱、鹽堿環(huán)境中維持胞內(nèi)水平衡。功能層面，巴基斯坦賴氨酸芽孢桿菌表現(xiàn)出“促生-抗病-解”三合一特性。實(shí)驗(yàn)室條件下，其IAA產(chǎn)量達(dá)118mg/L，明顯高于同屬菌株，可刺激小麥根長(zhǎng)增加35%，干重提高28%；菌液處理后，花生根結(jié)線蟲侵染率下降42%，對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化抑制率超60%，為線蟲綠色防控提供新選擇。此外，該菌對(duì)革蘭氏陰性植物病原菌具有明顯抑菌圈，代謝產(chǎn)物中的酶抑制劑可干擾細(xì)菌雙功能酶系統(tǒng)，相關(guān)菌機(jī)制仍在持續(xù)解析?？茖W(xué)家正給它插入耐旱基因，希望讓戈壁也長(zhǎng)出稻浪。

YPG培養(yǎng)基（Yeast Extract-Peptone-Glucose Medium）是酵母提取物-蛋白胨-葡萄糖培養(yǎng)基的簡(jiǎn)稱，堪稱微生物實(shí)驗(yàn)室的“快餐”。配方極簡(jiǎn)：酵母粉5 g、蛋白胨10 g、葡萄糖20 g，補(bǔ)水至1 L，pH 6.2±0.2，無需調(diào)節(jié)即可滿足大多數(shù)菌、酵母及部分細(xì)菌的快速增殖需求。酵母粉提供B族維生素和微量元素，蛋白胨供給多肽與氨基酸，葡萄糖以高碳濃度啟動(dòng)酵母發(fā)酵型代謝，短短12 h就能讓釀酒酵母OD???沖破1.0，是發(fā)酵工程與分子生物學(xué)過夜預(yù)培養(yǎng)的優(yōu)先。若用于絲狀菌，只需降低葡萄糖至10 g，并加入微量元素液，28 ℃靜置2天，孢子產(chǎn)量可比PDA提高30%。YPG的另一優(yōu)勢(shì)是“可鹽可甜”：補(bǔ)加15%甘油即成YPG/甘油，用于酵母感受態(tài)制備；添加2%瓊脂便是YPG平板，藍(lán)白斑篩選、轉(zhuǎn)化子計(jì)數(shù)兩不誤。實(shí)驗(yàn)室里還流行“富氧版”——把葡萄糖提前115 ℃單獨(dú)滅菌，避免美拉德反應(yīng)，培養(yǎng)液顏色淺，下游HPLC檢測(cè)有機(jī)酸無干擾。質(zhì)量控制也輕松：高壓后若顏色發(fā)黃，說明葡萄糖與氨基酸高溫反應(yīng)，可改用過濾除菌；室溫保存1周仍澄清，即可繼續(xù)使用。憑借組分明確、成本低廉、配制快速，YPG培養(yǎng)基已從傳統(tǒng)釀酒實(shí)驗(yàn)室走向合成生物學(xué)、代謝工程與益生菌高密度發(fā)酵，成為微生物學(xué)家手中“養(yǎng)菌如泡茶”的經(jīng)典底牌?？茖W(xué)家正給它植入耐旱、耐鹽基因，讓它在西北旱地也能結(jié)瘤。溫泉熱堿芽孢桿菌

對(duì)白絹、根腐、灰霉的抑制率超七成；同時(shí)誘導(dǎo)植物開啟系統(tǒng)抗性，番茄未染病就先“武裝”葉片。瓜類鞘氨醇單胞菌

潘諾尼亞鎖霉（Itersonilia pannonica）是一株擔(dān)子菌門、鎖霉屬的低溫絲狀菌，原產(chǎn)中國(guó)，常見于草地、腐葉及冷藏蔬菜表面。菌絲白色至淡黃，擴(kuò)展呈絨毯狀，更適生長(zhǎng)17℃，pH6，需氧，對(duì)鹽濃度變化敏感，4℃保存即可。一、科研價(jià)值耐冷特性使其成為冷鏈?zhǔn)称费芯康哪Ｊ骄?；與氈狀金孢霉近緣，基因組含多種細(xì)胞壁降解酶基因，可用于低溫酶篩選及擔(dān)子菌系統(tǒng)發(fā)育分析。二、生物防治潛力培養(yǎng)濾液對(duì)灰霉、菌核等植物病原菌抑制圈達(dá)15–20 mm，并能分泌幾丁質(zhì)酶，分解線蟲卵殼，盆栽試驗(yàn)使番茄根結(jié)線蟲侵染率下降40 %，為開發(fā)低溫生劑提供候選。三、低溫酶應(yīng)用菌株在10℃仍產(chǎn)較高活性纖維素酶和β-葡萄糖苷酶，可用于低溫洗滌、紙漿漂白或冷鏈廢棄物降解，節(jié)能20 %，降低高溫處理成本。四、教學(xué)與質(zhì)控生物危害四類，培養(yǎng)簡(jiǎn)易，國(guó)內(nèi)多所高校將其列入“冷鏈微生物”教學(xué)實(shí)驗(yàn)，學(xué)生可通過梯度平板直觀觀察低溫生長(zhǎng)曲線，并用于冷藏食品監(jiān)測(cè)的陽性對(duì)照。未來，借助合成生物學(xué)，把潘諾尼亞鎖霉的冷活性酶基因?qū)牍I(yè)酵母，有望構(gòu)建“冷鏈-降解”一體化細(xì)胞工廠，為冷鏈物流、低溫環(huán)保和綠色防控提供新工具。小小鎖霉，用一把“冷鑰匙”開啟低溫生物技術(shù)的廣闊天地。瓜類鞘氨醇單胞菌