山東質(zhì)量好的HE染色分析

HE染色原理1、細胞核染色的原理：蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。2、細胞漿染色的原理：伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH在胞漿蛋白質(zhì)等電點（4.7—5.0）以下時，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細胞漿帶正電荷，就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽離子結(jié)合，使細胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。冰凍切片是否可以做HE染色？山東質(zhì)量好的HE染色分析

HE染色等常規(guī)染色，組化或是熒光優(yōu)先推薦做石蠟切片。原因：石蠟切片對組織的形態(tài)保存比冰凍切片好，并且對抗原基本無影響。脂質(zhì)染色（油紅O染**odipy染色，尼羅紅染色）必須做冰凍切片，不能做石蠟切片。以下染色必須要新鮮或冷凍組織冰凍切片：ROS染**-半乳糖甘酶染色，ATP染色，膽固醇染色。如果標本已經(jīng)放在-80°冰箱冷凍了之后又想要做石蠟切片，將標本取出來千萬不要解凍直接放于固定液內(nèi)固定（在固定液內(nèi)邊解凍邊固定）。組織形態(tài)結(jié)構(gòu)保存完好順序：新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定石蠟切片＞組織-80°冷凍后投入固定液內(nèi)固定石蠟切片＞新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定冰凍切片＞組織-80°冷凍后直接冰凍切片。上海比較好的HE染色外包冰凍組織切片的HE染色。

HE染色在**染色中的應(yīng)用，小細胞肺*是肺*中分化程度比較低、惡性程度比較高的一種惡性**，生長迅速，轉(zhuǎn)移較早，五年存活率*為1%-2%，預(yù)后非常差。其小細胞肺***細胞HE染色的特征，主要表現(xiàn)為組織結(jié)構(gòu)，包括巢狀、小梁狀、實性片狀，常有菊形團形成，*巢周圍的瘤細胞呈柵欄狀排列，*細胞較小，一般小于三個靜止的淋巴細胞，呈圓形、卵圓形或短梭形，胞質(zhì)稀少，胞界不清，核染色質(zhì)呈細顆粒狀，核仁缺乏或不明顯，核分裂象每十個高倍視野大于十一個，常見大片狀壞死。

HE染色切片中出現(xiàn)類似色素樣的點狀結(jié)晶和黑色光滑的細胞核原因：切片封片前放置在空氣中時間太長，以至于二甲苯揮發(fā)切片干燥所致。對策：移去組織切片上的蓋玻片和封固劑，重新處理。將切片水洗數(shù)分鐘，然后重新脫水、透明、封固。封片過程中要保持組織切片的輕度濕潤，盡量不要讓其干燥。細胞核呈紅、棕色改變原因：蘇木精染色液過度氧化和切片在蘇木精染液染色后返藍不足。對策：首先，每次染色之前檢查蘇木精染色液的染色能力，發(fā)現(xiàn)氧化過度應(yīng)及時更換。其次，可用流水、溫水或弱堿性溶液如稀氨水、0.2%碳酸氫鈉等，在蘇木精染色后，給切片以足夠的藍化時間。HE染色觀察細胞形態(tài)變化。

HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項：多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸，使溶液pH降低，從而影響染色。不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。多聚甲醛雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。多聚甲醛可長期存在于固定過的細胞或組織樣品中，固定完成后用適當?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時仍會有殘留，因此后續(xù)實驗結(jié)果如果受醛基影響，須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復(fù)，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作?？蒲谐鋵嶒灢僮髦瓾E染色。上海比較好的HE染色外包

HE染色，優(yōu)先南京英瀚斯生物。山東質(zhì)量好的HE染色分析

HE染色觀察細胞凋亡，凋亡檢測中形態(tài)學(xué)方法是**直觀、可靠的方法之一。對組織和各種細胞進行染色后，在光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察，通過觀察細胞的形態(tài)或染色的類型來判斷凋亡的發(fā)生與否。細胞涂片或細胞甩片的制備：對于貼壁細胞，可將蓋玻片放于培養(yǎng)器皿中，讓培養(yǎng)細胞長于玻片上，然后用藥物誘導(dǎo)細胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。對于懸浮細胞，用藥物誘導(dǎo)細胞凋亡后，離心1000r/min收集細胞，用PBS洗2次，收集調(diào)整細胞數(shù)為1X105/ml，涂片或用離心甩片，用4%多聚甲醛固定5min；在光學(xué)顯微鏡下，貼壁細胞由原來的梭形或多角形變小、變圓，核呈藍色或藍黑色，胞漿呈淡紅色，核固縮、破碎，形成凋亡小體等。懸浮細胞，整個細胞皺縮，核固縮，破碎，形成凋亡小體，染色質(zhì)顏色加深等。山東質(zhì)量好的HE染色分析